pVT102U/α-bgln重组真核表达质粒的构建和鉴定

构建重组真核表达质粒pVT102U/α-bgln使之可以在酿酒酵母中表达以获得β-葡糖苷酶,用于提高从植物中提取白藜芦醇的得率.以含有从黑曲霉中获得的编码β-葡萄糖苷酶(bgln)成熟肽的cDNA的克隆质粒pMD19T-bgln为模板,用PCR的方法扩增β-葡糖苷酶基因片段(bgln),利用真核表达载体pVT102U/α构建pVT102U/α-bgln重组质粒,PCR结果显示扩增片段约2.6kb,与预期相同.用酶切电泳验证重组结果的正确性,重组质粒酶切后显示其大小约10kb,大小及酶切图谱与预期相同.测序检测质粒重组后序列情况,经测序发现插入片段两端序列无改变,且读码框正确.pVT102U/α-bgln质粒构建成功.
分子生物学技术的发展和人类基因组计划的完成,使人类对基因的结构和功能的认识日益加深。基因工程领域又迎来了一个新的时代——功能基因组时代,它的任务就是解释大量生物体基因组测序结果,尤其是大量未经描述之基因的功能及其相应的蛋白质产物及功能。系统综合分析蛋白-蛋白相互作用将为了解蛋白质的功能提供重要的信息。酵母双杂交是目前研究蛋白-蛋白相互作用的所有方法中较为简便、灵敏和高效的一种方法。酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system）在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中研究蛋白质间相互作用的一种非常有效的分子生物学方法。是一种新的直接于细胞内检测蛋白-蛋白相互作用,并且灵敏度很高的遗传学新方法,并被推广到了诸如细胞周期调控、信号传导、肿瘤基因表达等多个研究领域。
目的:观察冰刺激加舌肌训练对吞咽功能障碍的治疗效果.方法:随机选择治疗组与对照组40例吞咽功能障碍的患者,治疗组采用冰刺激及舌肌训练法,对照组仅采用舌肌训练.结果:按吞咽功能障碍疗效评价标准比较,治疗后治疗组评分明显优于对照组,有显著性差异(P<0.05).结论:冰刺激加舌肌训练对脑血管病吞咽功能障碍有良好效果.
[目的]针对气候炎热葡萄产区夏季高温导致的高温胁迫、果实成熟过快、糖高酸低,进而影响葡萄酒品质等现状,探讨炎热气候条件下喷施抗蒸腾剂(Anti-transpirant)对酿酒葡萄光合特性、生理指标、果实与葡萄酒相关品质的综合影响,旨在为改善炎热气候产区酿酒葡萄与葡萄酒综合品质提供理论依据.[方法]试验于2017年在新疆和硕县开展,以酿酒葡萄‘赤霞珠’(Vitis vinifera L.cv.Cabernet Sauvignon,CS)和‘雷司令’(Vitis Vinifera L.cv.Riesling)为材料,于2017年7月26日、8月9日两次喷施抗蒸腾剂后,对叶片采样并测定光合指标、气孔特性、生理指标,在果实成熟过程中监测成熟度变化;并利用超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)对成熟期果实中葡萄糖与果糖含量进行测定;采收后(‘雷司令’:8月16日;‘赤霞珠’:9月8日)采用小容器酿造法酿造赤霞珠干红与‘雷司令’干白葡萄酒,终止发酵后测定葡萄酒的基本理化指标.[结果]抗蒸腾剂显著降低了酿酒葡萄的净光合速率与气孔导度,但胞间CO2浓度、蒸腾速率在两个品种中表现不一致;利用扫描电镜观察发现,抗蒸腾剂处理显著减小了‘赤霞珠’和‘雷司令’的未成熟叶片气孔宽度(41.02％、46.94％)、开张程度(59.59％、67.43％)及分布密度(13.84％、4.97％),从而在炎热气候条件下降低水分散失;抗蒸腾剂处理显著降低了叶片中丙二醛、游离脯氨酸含量,并降低了‘雷司令’的可溶性蛋白含量,对叶绿素含量无显著影响,有利于植株减轻高温胁迫;抗蒸腾剂处理后,能够显著延缓果实还原糖含量积累和有机酸的降解,成熟期‘赤霞珠’与‘雷司令’果实中总还原糖含量分别降低6.6 g·L-1、11.7 g·L-1,总酸含量分别增加0.57 g·L-1、0.76 g·L-1,葡萄糖和果糖含量均显著降低, ‘赤霞珠’和‘雷司令’葡萄酒的酒精度分别降低了0.71％、0.39％.[结论]抗蒸腾剂具有调节光合特性、减少水分蒸发、提高抗高温能力、降糖增酸、降低酒精度的作用,具有易操作、低成本、综合效果好等优势.
酒窖的窖泥中有非常丰富的微生物群系,包括多种酵母菌.试验针对甘肃省敦煌白酒厂提供的窖泥,采用选择培养基分离方法,筛选窖泥中的优势菌群,并对其进行生化特性研究和分子生物学鉴定.同时对白酒酒糟进行水解并对水解液成分进行测定,利用酒糟水解物作为培养基成分,研究其对已分离酵母菌生长特性的影响.结果表明:从窖泥中分离获得的优势菌群为枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌,酿酒酵母的最适生长温度33℃,最适生长pH值5.5,最适发酵温度30℃,最适发酵pH值5.0,在糖度为15的麦芽汁培养基中发酵最快;酒糟水解物中还原糖含量38％,氮含量0.316％,Mn、Zn、Mg、Na、K元素含量分别为1.52×10-2％、9.0×10-6％、1.34×10-6％、8.88×10-2％和0.417 8％.与OXOID市售酵母提取物相比,该酒糟水解物中的糖含量高于酵母提取物,能够满足酵母生长需求.
针对啤酒酵母扩培过程为复杂的生化反应过程,且在不同工艺阶段温度控制要求不同,结合模糊控制对非线性、大滞后、难于建立数学模型的复杂过程可实施有效控制的特点,设计了由SISO模糊控制器和PID-MISO模糊控制器组成的变结构模糊控制系统;介绍了变结构模糊控制的PLC实现方法;采用此方法设计的温度控制系统在实际工程应用中取得了较满意的控制效果.