毕赤酵母分泌表达SAMS及表达产物活性分析

[目的]利用毕赤酵母分泌表达S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS).[方法]以酿酒酵母(Saccharomyce cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因2(sam2),构建重组毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K-sam2,转化毕赤酵母GS115,以甲醇诱导表达分泌蛋白SAM合成酶,并用HPLC测定重组蛋白的酶活力.[结果]经SDS-PAGE鉴定重组蛋白分子量约50 kD,比理论值42.5 kD稍大,可能是分泌过程中糖基化等加工造成.体外酶促反应结果显示,伴随甲醇诱导及初步纯化过程的进行,蛋白活力逐步提高,纯化后比活力为61.48 U/mg.[结论]该研究首次实现了SAM合成酶的胞外表达,为开发和建立体外酶促法生产SAM工艺奠定了基础.
筛选到一株具有较高GSH产量的酵母菌株S.cerevisiae 2165,然后以该菌株为出发菌,采用紫外照射、紫外照射+LiCl联合处理、亚硝基胍(MNNG)等诱变处理,获得一株高产GSH的酿酒酵母优良菌株S.cerevisiae JN-5-8.该菌株具有稳定的遗传性能,在经过优化的培养条件下培养24h,其GSH产量达到339.1mg/L,比出发菌株提高2.2倍.
为探索北方传统埋土方式和其他不同埋土方式下葡萄根部及藤蔓部温度变化规律及其保温效果,对宁夏贺兰山东麓冬季酿酒葡萄不同埋土方式下保温性能进行对比研究.结果表明,1)土覆乙烯醋酸-乙烯酯(EVA)膜的保温效果最好,翌年葡萄品质、产量最佳,产量高出传统埋土方式30%.2)传统埋土方式下葡萄冻害依然存在,虽埋土带下根部受冻较轻,但埋土区域外的侧根严重受冻.3)土覆EVA膜为推荐使用的北方冬季埋土越冬方式,其他推荐的方式依次是土覆聚氯乙烯(PVC)膜、土覆聚乙烯(PE)膜、PVC膜覆土及沟埋.
采用膨润土吸附-微波催化氧化技术处理葡萄酒生产废水,考察了膨润土用量、H_2O_2用量、微波辐照时间、微波功率、pH等5个单因素对葡萄酒生产废水处理效果的影响.确定了最终反应条件为:膨润土用量2.6 g、H_2O_2用量2.1mL、功率720 W、加热时间25 min、pH为3.5.在此条件下,COD去除率达到了80%以上.结果表明,该方法可快速有效地处理葡萄酒生产废水.
本文从酿酒葡萄埋土防寒增加了成本,气候变暖影响葡萄酒质量,晚霜冻危害频繁发生,葡萄病虫害成灾规律变化,葡萄酒庄经营困难等五个方面,论述了贺东地区酿酒葡萄产业的现状及存在的短板.提出要强化政府引导与政策扶持,增强产业活力;开展新品种区域化布局,应对气候变化;生产中贯彻轻简化栽培技术,降低生产成本;应用防寒、防晚霜保护仓新技术,实现酿酒葡萄种植业与生态保护的双赢.
红曲菌在我国有着一千多年的应用历史,红曲在酿酒、腐乳、食醋、食品色素、中药等方面都有着广泛的应用.近年来以降胆固醇物质Monacolin K(莫纳可林K)为主要成分的功能性红曲正日益受到保健品市场的青睐,如何提高红曲发酵产品中莫纳可林K的含量也成为了制约功能性红曲行业发展的主要技术难题.该文论述了红曲菌的特性、莫纳可林K的结构、降胆固醇机制以及产量的控制策略,为提高功能性红曲莫纳可林K的产量,促进红曲保健品产业发展提供了参考.