白酒酒醅高产酯酵母筛选鉴定及其发酵性能研究

采用平皿培养法从浓香型白酒酒醅中分离酵母,筛选其中具备耐受性良好的产酯酵母,并结合形态学 、生理生化试验及26S rDNA分子生物学鉴定筛选酵母,研究筛选酵母与酿酒酵母混合发酵的发酵特性.结果表明,在模拟白酒酿造环境耐受性试验中,3株高产酯酵母均具有一定的耐酸性,且在乙醇浓度为10％ 时保持较好的生长特性,但在温度为40℃ 时生长特性均受到抑制,而酵母菌株W5相较其他两株高产酯酵母耐受性能更好,经鉴定为戴尔有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii);在筛选酵母与酿酒酵母模拟白酒发酵试验中,酿酒酵母发酵速率最快,发酵时间为6 d;T.delbrueckii W5发酵时间为8 d;二者混合发酵时间为9 d.在相同的培养条件和发酵条件下,T.delbrueckii纯培养方式下酸度较其他两种培养方式高,其酸度范围为7.62～7.72 g/L,说明T.del-brueckii产酸能力很高.但T.delbrueckii W5挥发酸产量较酿酒酵母低,其挥发酸范围为0.32～0.48 g/L.另外酿酒酵母纯培养乙醇含量为13.18％ ～13.50％,说明酿酒酵母相较于T.delbrueckii具有强发酵能力,二者之间混合发酵可以提高T.delbrueckii单独发酵产乙醇能力.可见,戴尔有孢圆酵母虽使发酵时间稍微延长,但产酸和产乙醇能力大大增强,可提高产量和丰富酒香.
本试验以酿酒酵母和枯草芽孢杆菌作为混合菌种发酵小麦麸皮,通过Amberlite XAD-2柱分离纯化制备麦麸阿魏酰低聚糖(feruloyl oligosaccharides,FOs),探讨麦麸FOs对敌草快(diquat)诱导的大鼠氧化应激是否有缓解作用.试验选用体重相近的断奶雄性大鼠48只,随机分为未攻毒组、攻毒组、攻毒+100 mg/kg BW麦麸FOs组、攻毒+200 mg/kg BW麦麸FOs组、攻毒+300 mg/kg BW麦麸FOs组和攻毒+100 mg/kg BW维生素C组,每组8个重复,每个重复1只鼠,各组大鼠均饲喂相同的商业饲料.麦麸FOs和维生素C配制成水溶液,采用灌胃的方式给予,未攻毒组、攻毒组用生理盐水替代,灌胃体积0.2 mL,连续灌胃15 d.灌胃结束当天,未攻毒组大鼠注射0.3 mL生理盐水,其他5组按0.1 mmol/kg BW的剂量腹腔注射0.3 mL敌草快.敌草快攻毒12 h后取样,分析各组大鼠血浆以及肝脏、肾脏和回肠中总抗氧化能力(T-AOC),过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及谷胱甘肽(GSH)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量.结果显示:1)通过混菌发酵小麦麸皮制备麦麸FOs,利用Amberlite XAD-2柱进行分离纯化,获得的麦麸FOs浓度为0.059 mmol/g.2)腹腔注射敌草快显著降低大鼠血浆中SOD活性和GSH含量(P<0.05),显著降低大鼠肝脏中T-AOC,CAT、GSH-Px活性及GSH含量(P<0.05),显著降低大鼠肾脏中T-AOC及CAT、SOD活性(P<0.05),显著降低大鼠回肠中T-AOC,CAT、GSH-Px活性及GSH含量(P<0.05),并显著提高大鼠血浆和各组织中8-OHdG含量(P<0.05).3)在敌草快引起的氧化应激状态下,灌胃一定剂量的麦麸FOs可以显著提高大鼠血浆中SOD(400 mg/kg BW)、GSH-Px活性(100和200 mg/kg BW)以及GSH含量(100和200 mg/kg BW)(P<0.05),显著提高大鼠肝脏中T-AOC(100、200和400 mg/kg BW),CAT(200和400 mg/kg BW)、SOD(100、200和400 mg/kg BW)和GSH-Px活性(100、200和400 mg/kg BW)以及GSH含量(100、200和400 mg/kg BW)(P<0.05),显著提高大鼠肾脏中T-AOC(400 mg/kg BW),CAT(200 mg/kg BW)和GSH-Px活性(200和400 mg/kg BW)以及GSH含量(400 mg/kg BW)(P<0.05),显著提高大鼠回肠中T-AOC(200 mg/kg BW),SOD(400 mg/kg BW)和GSH-Px活性(100、200和400 mg/kg BW)以及GSH含量(100、200和400 mg/kg BW)(P<0.05),显著降低血浆和各组织中8-OHdG含量(血浆、肾脏、回肠:100、200和400 mg/kg BW;肝脏:100 mg/kg BW)(P<0.05);且灌胃200、400 mg/kg BW麦麸FOs后,大鼠血浆和组织中部分抗氧化相关指标可恢复到正常生理状态水平.综上所述,本试验制备的麦麸FOs可以通过有效提高大鼠血浆和组织中抗氧酶活性和GSH含量,降低DNA氧化应激代谢产物8-OHdG的含量,有效缓解由敌草快诱导产生的氧化应激.
肉桂酸4-羟基化酶（Cinnamate 4-hydroxylase, C4H）是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶，能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE 技术，克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因（CsC4H）的全长序列，其中开放阅读框长1518 bp，编码505个氨基酸，推测蛋白分子量为58.15 kD，理论等电点为9.29。利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1840 bp的启动子序列。该启动子区域除了分布有TAAT-box和CAAT-box等基本转录元件外，还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达。将该基因重组至表达载体pYES-DEST52上，并在酿酒酵母 WAT11中进行真核表达。利用 LC-MS方法检测酶反应产物，结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸。
以平均初始体质量约2 g的凡纳滨对虾为试验对象,采用三氧化二铬(Cr2O3)作为指示剂,间接测定法测定发酵蚕蛹粉(FPM)、棉粕(CM)、菜粕(RM)、直火鱼粉(FM)、啤酒酵母(YB)、发酵豆粕(FSBM)和浓缩大豆蛋白(SPC)7种饲料原料粗蛋白和氨基酸的消化率.试验显示,凡纳滨对虾的增重率和特定生长率在FM组达最高(P<0.05),但各试验组对虾的成活率无显著差异.7种饲料原料对凡纳滨对虾粗蛋白消化率范围在70%～85%.依次为SPC(83.98%)>FSBM(78.28%)>CM(77.4%)>RM(69.49%)>FM(64.78%)>FPM(63.2%)>YB(44.85%),除了YB外,各原料间粗蛋白消化率差异不显著.其中,以SPC消化率最高,YB的消化率最低,且显著低于SPC及FSBM.7种饲料原料的氨基酸消化率范围在40%～95%,除了组氨酸和谷氨酸外,各试验原料的必需氨基酸消化率间差异不显著,FSBM中组氨酸消化率最高,显著高于FM和YB组;同样,谷氨酸消化率也在FSBM中达最高(P<0.05).试验结果表明:凡纳滨对虾对棉粕、菜粕和豆粕及其衍生产品与直火鱼粉在蛋白质和氨基酸的利用率上较为相似,运用在配方优化中,有利于降低饲料配方成本.
在康维皿比色法的基础上,建立了一种快速测定果醋发酵液残留乙醇的新方法。结果表明：采用康维皿作为反应容器,乙醇反应体系在580nm处具有最大吸收峰。果醋中的乙醇浓度在0.5%～10%（v/v）之间呈良好线性,回归方程为Y=0.07389X-0.00886,相关系数R2=0.9995。该方法具有取样量少、快速、准确、无需复杂仪器等优点,不仅适于测定果酒或果醋终产品的乙醇含量,也便于跟踪果酒或果醋生产过程的乙醇含量动态变化,具有较好的应用推广价值。
将酿酒酵母、假丝酵母、嗜热链球菌分别接种到含不同硒浓度的培养液中进行培养，测定各菌株的生物量及生物硒含量，筛选出生物硒合成能力强的菌株，并将其两两混合、最后完全混合培养，得到生物硒合成能力强的混合菌株。结果表明，3种菌株生物硒合成能力由弱到强分别为酿酒酵母（11．7533μg/mL）、嗜热链球菌（11．9890μg/mL）、假丝酵母（12．8973μg/mL）；嗜热链球菌-酿酒酵母混合制备的复合菌株生物硒合成能力最强，生物硒含量最高达到15．8864μg/mL。