酿酒酵母ADH3基因的敲除

设计含有与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)编码乙醇脱氢酶Ⅲ的ADH3基因ORF两侧序列同源的长引物,以质粒pUG6为模板进行PCR构建带有Cre/loxP系统的敲除组件.转化酿酒酵母YS3(Saccharomyces cerevisiae),并将质粒pSH65转入阳性克隆子.半乳糖诱导表达Cre酶切除Kanr基因,在YPD培养基中连续传代培养丢失pSH65质粒,在原ORF处留下一个loxP位点,获得ADH3单倍体缺陷型菌株.利用同样的方法再次敲除双倍体的另一个等位基因.最终获得ADH3双倍体基因缺陷型突变株YS3-ADH3.
以26株野生酒类酒球菌为研究对象,通过测定β-葡萄糖苷酶活性筛选出8株高酶活力菌株.进而以2株商业菌株为对照,分析温度、pH值、酒精体积分数、葡萄糖、果糖以及模拟酒条件对8株高酶活菌株中β-葡萄糖苷酶活性的影响.结果表明:CS-1b酶活性质最优,其酶活性质为:最适pH值为5,最适温度为30℃,在葡萄酒pH值和温度下均有较高酶活;高酒精度对该酶有强烈抑制作用;低质量浓度葡萄糖和果糖对该酶有轻微激活作用,高质量浓度葡萄糖和果糖均有轻微抑制作用;菌株CS-1b在模拟酒条件下可保持较高酶活力3.755μmol/(g·min),相对酶活力为34.55％.
2017年国网辽宁省电力有限公司对电力系统冰区分布图进行了修正,将辽南地区影响500 kV高压输电线路设计的50年一遇覆冰厚度标准由10 mm提高至15～20 mm.该文对现有辽南地区500 kV主干线路导线形式及杆塔应用等情况进行了总结,以《国家电网公司输变电工程通用设计110(66)～500 kV输电线路分册》相关杆塔模块为计算基础,对覆冰厚度调整前后塔重及基础混凝土量的变化进行计算分析,得出了覆冰厚度调整对辽南电网500 kV线路本体投资的影响范围值,供后续新建工程参照.
目的探讨不同时间内因造模方法 对模型大鼠胃动素(MTL),胃泌素(GAS)的影响.方法分为正常组,模型I组(高脂饮食+白酒灌服10 d),模型Ⅱ组(高脂饮食+白酒灌服20 d),模型Ⅲ组(高脂饮食+白酒灌服30 d);运用放免法观察MTL,GAS的变化.结果模型Ⅱ组,Ⅲ组MTL,GAS水平均显著升高,模型I组与对照组比较无显著性差异.结论胃动素,胃泌素指 标异常所产生的病理生理效应,会出现腹胀,纳呆,大便溏,呕恶等.高脂高糖饮食和白酒灌服20 d是脾胃湿热证病理模型内因造模中较合适的时间.
前期,从新疆哈萨克族奶酪中分离到127株酵母菌,选取其中生长状况良好18株菌进行潜在益生酵母菌筛选试验.在不同胆盐质量浓度、不同pH值、模拟人体胃液及温度的条件下进行培养,并以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,观察其抑制有害菌的能力,同时对菌株的表面疏水性及自动聚集能力也进行测定,系统的分析了菌株的益生特性.最终,在18株酵母菌中得到4株菌(Y1、H1、Y36-6、L4)在以上条件下有较好的存活率,为潜在益生酵母菌.并对这4株酵母菌进行生理生化试验及26S rDNA序列测定,将结果同NCBI数据库中提供的酵母菌序列进行比对,以DNA Star软件进行相似性分析,得到H1菌株属于马克斯克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)相似度为99％,Y1菌株属于酿酒酵母属(Saccharomycete)相似度为99％,Y36-6和L4属于毕赤酵母属(Pichia kudriavzevii)相似度99％.
以旱柳Salix matsudana及东南景天Sedum alfredii为实验材料,利用改进的SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术分别构建了旱柳盐胁迫和东南景天氯化镉胁迫后的全长cDNA文库,把文库包装到酵母表达载体中,转化酿酒酵母感受态细胞,通过在尿嘧啶缺陷型培养基上添加不同浓度梯度的筛选压来筛选酵母高抗转化子,并对其基因进行鉴定.结果从旱柳盐胁迫全长cDNA文库中得到了2个能耐受1.709 mol·L-1氯化钠的阳性转化子,从东南景天氯化镉胁迫全长cDNA丈库中得到了2个能耐受0.123 mmol·L-1氯化镉的阳性转化子.分别测定对照菌(转空载体重组菌INV/p YES2.1)和转cDNA重组菌在无胁迫、高盐(1 mol·L-1氯化钠)和高氯化镉(150 μmol·L-1)胁迫下的生长曲线.结果表明高耐盐/耐镉相关基因的表达对酵母正常生长没有影响.在含高盐或者高镉的培养基里,2个转基因重组菌的延滞期短于对照菌.这表明高耐盐/耐镉相关基因的表达可以提高酵母细胞的耐盐/耐镉能力.对6号耐盐转化子序列进行生物信息学和表达模式分析,发现该基因为一盐胁迫应答相关基因SMpla6(暂定名).用酿酒酵母建立了一个高效快速筛选植物抗逆基因的体系,研究结果为快速克隆植物抗逆相关基因奠定基础.