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人铜锌超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及在酿酒酵母中的分泌表达

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2024-07-18 阅读:561
目的:探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌表达.方法:采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu/Zn-SOD的cDNA,与酿酒酵母交配因子(MF)α信号肽编码序列融合,将融合基因插人大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2.0,构建真核分泌表达质粒pYES-MS,将其转化入酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl中,用半乳糖进行诱导表达,采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析及电泳谱活性染色测定表达产物分泌情况及其活性.结果:该工程菌可高效表达一相对分子质量约为21 000的蛋白并与兔抗人Cu/Zn-SOD多抗有特异的免疫反应,同时在培养基上清中检测到此表达蛋白的分泌,具有特异性SOD酶活性.结论:作者成功构建了pYES-MS/INV菌株,该菌株大量表达有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,并有部分hCu/Zn-SOD分泌到酵母细胞外,为开发hCu/Zn-SOD的基因工程产品奠定了良好的基础.
以羟自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性为考察指标,考察α、β、γ-环糊精及2-甲基、2,6-二甲基、2,3,6-三甲基及羟丙基等β-环糊精的衍生物与啤酒花中重要树脂成分的氢化衍生物六氢β-酸所形成的环糊精包合物的抗氧化活性.结果表明:上述六氢β-酸环糊精包合物均具有不同程度清除·OH和DPPH自由基的活性,且清除活性均好于同浓度下未包合的六氢β-酸.在此基础上,以协同系数为指标,苯甲酸钠为对照,研究六氢β-酸-2-甲基-β-环糊精、六氢β-酸-γ-环糊精、六氢β-酸-羟丙基-β-环糊精、六氢β-酸-2,3,6-三甲基-β-环糊精包合物与食品添加剂VC、NaCl、柠檬酸、蔗糖在·OH和DPPH自由基体系的协同抗氧化作用.结果表明:·OH体系中,各种包合物/柠檬酸的双组分体系和包合物/VC-NaCl-蔗糖的多组分体系均无协同抗氧化性;而包合物/VC、包合物/NaCl、包合物/蔗糖的双组分体系有较好的协同抗氧化性.DPPH自由基体系中,除包合物/蔗糖的双组分体系外,其他双组分和多组分体系均具有较好的协同抗氧化作用.而对照品苯甲酸钠与4 种食品添加剂所形成的双组分体系中均无协同抗氧化作用.
新疆乌苏啤酒有限责任公司生产废水采用深井曝气工艺处理,工艺适应性强、处理效果好,运行稳定,出水水质可达<污水综合排放标准>(GB8978-96)中二级标准.其工艺技术可供同类企业借鉴和推广.
针对寒冷地区冷却塔结冰的现状和冷却原理,介绍了中心水场冷却塔改造提出的增设热水幕改造方案和运行操作方法.通过实际运行考察,该方案防冰效果明显.并提出了今后的完善措施.
依据渤海海冰物理和力学特征值和国内水池实验室能力,以1∶10~1∶30比尺要求,发展了DUT-1合成模型冰.文中简介该模型冰的理想参数、成分和制备过程.就其弯曲强度和弹性模量进行系统的实验分析.通过500多次弯曲实验,获得该模型冰在不同加载速度下的破坏方式,各向同性证据和弯曲强度为35~65 kPa和弹性模量平均53 MPa的结果.并且得到弯曲强度和弹性模量在实测湿密度范围内呈递增关系,浸水模型冰性能稳定时间超过4h,弹性模量与弯曲强度之比82%超过2 000.
液态法白酒的质量缺陷主要表现为酸低、酯低、高级醇含量高.酸低这一缺陷尤为突出,也是蒸馏最难解决的问题.本文作者针对这一缺陷,研究了微分蒸馏、二次蒸馏对酸的蒸馏效果,结果表明:二次蒸馏对酸的蒸馏效果较好,采用该法,完全可以解决液态法白酒中酸低的质量缺陷.

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