酿酒酵母蔗糖酶基因的克隆、异源表达及重组酶学性质研究

以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到蔗糖酶基因(suc 2),并将其克隆到表达载体pSE380中,将得到的重组质粒pSE-suc 2转化进E.coli BL21中,利用镍金属螯合层析方法分析测定其酶学性质.重组菌株的SDS-PAGE结果显示重组蔗糖酶基因(suc 2)有60kDa目的蛋白出现,纯化的SDS-PAGE分析得到均一的蛋白条带;重组蔗糖酶的Km值为47.73mmol/L,最大反应速率为79.59mg还原糖mg-1蛋白min-1,最适温度为42℃,最适pH值为5.5,Zn2+、Cu2+对重组蔗糖酶酶活有较强的抑制作用,Ba2+、Mg2+、Mn2+对重组蔗糖酶酶活稍有激活作用.
为探讨单菌发酵对果酒风味的影响,利用GC-MS分析对风味影响的物质基础,利用电子感官(电子鼻和电子舌)和人为感官判定菌种对咖啡果酒整体风味的影响,研究结果为酿造优质风味咖啡果酒筛选最佳菌种组合提供理论参考.实验结果表明,4种酵母中B和D酿成的果酒中乙醇的相对含量高于其他2种,C损失略高于其他3种酵母.GC-MS分析共检出化合物26种,其中酯类15种、醇类7种、其他化合物4种;所检化合物除酸类物质外,均具有令人愉悦的风味;醇类均为高级醇,主要是异戊醇和苯乙醇;酵母D峰面积明显高于其他3种,而醇酯比C(8.61)＞A(4.17)＞B(1.16)＞D(1.05).电子感官检测发现,电子鼻和电子舌的第1主成分的贡献率均达到98％以上,但大多存在交叉,区分效果较差,说明风味和口感较为接近;人为感官区分结果与电子感官结果一致.
目的:通过多指标正交试验法优选黄连酒炙工艺,为规范酒黄连的炮制工艺提供技术参数.方法:采用正交试验法,以酒黄连饮片外观性状、醇浸出物和3种牛物碱含量为考察指标,选择黄酒量、闷润时间、炒制时间及炒制温度四个凶素(每因素三个水平),埘酒炙黄连工艺进行优选.结果:黄酒量、炒制温度对试验结果有显著性影响,影响程度为炒制温度>黄酒量>闷润时间>炒制时间,确定最佳炮制工艺为黄酒加入量15%,闷润40 min,100℃炒制10 min.结论:本研究对规范酒炙黄连的炮制工艺具有一定的意义,为制备酒黄连标准饮片进行下一步研究工作奠定了基础.
研制了12脉动整流融冰方式、额定输出直流电流5000 A下容量最大的直流融冰系统.根据融冰交流线路参数,对PCS-9590融冰系统设计研制过程中几个比较重要的方面,包括融冰方案、主电路设计、过电压和绝缘配合、控制保护系统等进行较为详细的论述.现场应用表明,直流融冰是解决线路覆冰、缓解冰雪灾害的有效方案.
针对高压输电线路覆冰严重威胁到国家电网稳定正常运行的问题,对高压输电线路覆冰爆破除冰进行了研究.应用LS-DYNA计算最优控爆参数,确定输电线路覆冰最佳装药量、以及装药与输电线路最优间隔值,并通过缩比爆破除冰实验验证了仿真计算结果.结果表明,有效覆冰参数,以及高压输电线与覆冰表面摩擦系数的确定为爆破除冰控爆参数的计算提供了有力保证;通过高速相机全程拍摄可知,缩比爆破除冰实验研究获得了较好的除冰效果,表明高压输电线路覆冰爆破除冰控爆参数具有可靠性及可行性,可为高压输电线路爆破除冰方案设计提供依据.
目的：建立一种筛选自然界产纤维质降解酶系基因的新方法。方法：对酿酒酵母表达载体pYES2多克隆位点加入真核生物稀有限制性酶切位点SfiI进行改造,利用SMART技术,以大肠杆菌文库为转导,构建了拟青霉（Paecilomyces sp.H28）的酿酒酵母全长cDNA表达文库。结果：利用纤维质-刚果红染色法从文库筛选到多种纤维素和半纤维素降解酶系基因。结论：成功构建了拟青霉的酿酒酵母表达cDNA文库,加快了纤维质降解酶系基因的快速分离,也为其它相关基因的快速分离提供了有益的借鉴。