[目的]观察G250抗原基因编码区cDNA全长基因片段在酿酒酵母中诱导表达情况,并初步探讨其作为肿瘤治疗中的意义.[方法]应用基因重组技术将人G250 cDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NT C,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NT C-G250并转化酿酒酵母菌株INVSc1,筛选阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的Western blot检测.[结果]成功构建pYES2/NT C-G250重组酿酒酵母诱导表达质粒,证实其能够在酿酒酵母中诱导表达,表达量随诱导时间而变化,8～12 h达高峰.[结论]人G250基因片段能够在酿酒酵母中表达,为进一步探讨基因重组酿酒酵母G250疫苗抗肿瘤效应及其安全性打下基础.
通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖还原酶(XR)基因XYL1.将该基因连入酵母表达载体pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶(TPI)启动子下,得到融合表达载体pYX-XYL1.通过电转化方法将pYX-XYL1转入酿酒酵母Saccharonmyces cerevisiae W303-1A中,酶活测定表明,在酿酒酵母中树干毕赤氏酵母木糖还原酶(XR)基因XYL1得到活性表达,2酿酒酵母转化子粗酶液中木糖还原酶活分别为0.89U/mg(蛋白)和0.83U/mg(蛋白),为供体菌的1.5倍多.与基因供体菌不同,木糖还原酶基因在酿酒酵母中表达不需木糖诱导,为组成型表达.树干毕赤氏酵母木糖还原酶(XR)基因XYL1的成功表达为后续的利用木糖的酿酒酵母菌株的构建奠定了基础.
本发明公开一种多味结合清香型白酒，由清香型白酒50～99％作基酒，与下列至少一种白酒勾兑而成：酱香型白酒0.1～25％，浓香型白酒0.1～35％，米香型白酒0.1～15％，凤香型白酒0.1～30％，豉香型白酒0.1～12％，特型白酒0.1～20％，芝麻香型白酒0.1～20％，药香型白酒0.1～10％，老白干香型白酒0.1～15％，四川小曲清香型白酒0.1～15％，馥郁香型白酒0.1～15％。制备方法由原料预处理、晾茬、下曲、堆积发酵、缸池准备、大茬入缸发酵、大茬出缸蒸馏、二茬入缸发酵、二茬出缸蒸馏、陈酿、勾兑调味定型工序组成。工艺操作简单，成本低，易推广，开创了清香型白酒新风格新流派。
木质纤维素生产乙醇已成为世界各国研究开发的热点.但在酿酒酵母对木质纤维素稀酸水解产物的乙醇发酵中,对水解产物中的毒性物质非常敏感.菌种对水解液毒性物质耐受力相对较低是影响木质纤维素乙醇发酵工业化的主要因素之一.利用紫外线对酿酒酵母进行诱变,得到2株高效耐水解液中毒性物质突变株k和n.2株突变株发酵未脱毒的木屑稀酸水解产物的乙醇产量分别达到理论值的71.0%和61.3%,为进一步提高酿酒酵母耐毒性的研究和木质纤维素稀酸水解生产乙醇的工业化提供了基础.
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种理想的真核蛋白表达系统.将真菌细胞色素P450nor2基因亚克隆到酵母表达载体pAUR123中,构建重组表达质粒pAUR-P450nor2并转化酿酒酵母AH22,经Aureobasidin A筛选和菌落PCR鉴定得到阳性克隆.SDS-PAGE分析证实:重组的真菌细胞色素P450nor2在酵母细胞中实现了高表达.
[目的]为了提高酿酒酵母降解氨氮能力,对高效氨氮降解菌酿酒酵母培养条件进行初步研究.[方法]采用单因素试验考察不同碳源、氮源、无机盐和生长因子对JM14生长的影响;并在此基础上,采用正交试验设计对酿酒酵母的发酵培养基进行优化.[结果]蔗糖、硫酸铵、氯化钙和生物素有利于酿酒酵母的生长,碳源对JM14的生长影响最明显.优化后的发酵培养基配方为:蔗糖20 g/L,硫酸铵10 g/L,氯化钙6 g/L,生物素0.1 g/L,NaCl 0.1g/L,MgSO40.5 g/L;在此最佳配方条件下,酵母菌数可达到7.40×108 CFU/ml.[结论]该方法对酿酒酵母的发酵培养基进行了优化,为酿酒酵母的工业化生产应用提供了理论依据.
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