鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用研究

[目的]研究鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺和鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用.[方法]以鱼腥草为材料,浓度70％的乙醇为溶剂,设计L9(34)正交试验提取方法,优选出鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺条件；以多粘芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、裂殖酵母和酿酒酵母、黑曲霉为供试菌种,进行抑菌试验,研究鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用.[结果]优选出的提取方法为乙醇提取法,其较佳的提取条件为温度80℃,料液比1:20(g/ml),提取2次,每次提取2h;在此条件下,鱼腥草黄酮类物质的提取率达4.363％.鱼腥草叶乙醇提取液具有广谱抑菌特性,且对细菌的抑菌效果优于对真菌的抑菌效果；鱼腥草叶提取液对多粘芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、裂殖酵母、酿酒酵母和黑曲霉的最小抑制浓度分别为0.06、0.06、0.08、0.08、0.1、0.1和0.1 g/ml.[结论]研究出了鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺,并确定了其乙醇提取液的抑菌作用,为鱼腥草叶的进一步开发和利用提供了理论依据.
糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因.为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Snl203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因片段后,连接酵母表面展示载体pYD1,构建重组质粒pYDl-G.将pYDl-G转化酿酒酵母EBY 100细胞后,利用半乳糖诱导G蛋白的表达.利用细胞免疫荧光、Western Blotting及流式细胞仪检测酵母表面G蛋白的表达情况.细胞免疫荧光结果显示,转化了pYD l-G重组质粒的酵母细胞表面呈现出特异性荧光;Western Blotting结果显示,经半乳糖诱导后G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;流式细胞仪检测结果表明,随着半乳糖诱导时间的增加,G蛋白的表达量随之增加,并在诱导48 h时达到峰值.以上研究表明G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达,本研究为以酵母为活载体的新型口服疫苗的研制奠定了基础.
本发明公开了多粮浓兼复合香型白酒的生产工艺，是由以下步骤制得的：原料选用、原料准备、装甑蒸料、出甑、晾楂、加曲、堆积、入窖封窖、出窖、装甑蒸酒、量质摘酒和分型分级贮存。本发明多粮浓兼复合香型白酒是一种高品味、高档次、健康时尚的白酒，具有较强的生命力，幽雅舒适的复合香气，绵甜柔顺、酒体细腻、香味风韵、舒适顺口的白酒符合市场发展需求，必将受到更多消费者的青睐。
为研究栽培措施对酿酒葡萄脂肪酸组分的影响,以欧亚种(Vitis vinifera L.)酿酒葡萄品种赤霞珠(Cabernet Sauvignon)、霞多丽(Chardonnay)为实验材料,通过植物生长调节剂、摘叶、机械损伤、套袋、不同采收时间等方式进行处理分析.结果表明:葡萄果皮不饱和脂肪酸主要由亚油酸、油酸、棕榈油酸组成;亚麻酸未检测出;饱和脂肪酸主要由棕榈酸、硬脂酸、山嵛酸、花生酸组成.脱落酸、茉莉酸甲酯、光照强度、采收时间、机械损伤处理能够影响亚油酸的含量,并且这种影响与品种有关.在两个品种葡萄果皮中,都发现了呈显著正相关的月旨肪酸组分,但品种间差异较大;在霞多丽葡萄果皮中,呈显著正相关的脂肪酸组分明显多于赤霞珠;并且,饱和脂肪酸之间的相关性强于不饱和脂肪酸之间的相关性.结果将为改善葡萄果皮脂肪酸组分,进而提高果实品质提供理论依据.
研究高压脉冲电场在不同参数、不同理化条件下处理废啤酒酵母,破坏酵母的细胞结构,使蛋白质和核酸渗出.结果表明,随着电场强度的加大、处理温度的提高、离子强度的增大、处理时间和PEF处理后静置时间的延长,蛋白质和核酸的溶出量增加.将废啤酒酵母经清洗除杂并离心后加去离子水配成的一定浓度的悬浮液通过高压脉冲电场,当场强为30kV/cm,温度为45℃,处理时间为400μs时,蛋白质溶出量达到4.042mg/mL,是未经高压脉冲电场处理的5倍,此时核酸的溶出量为0.382mg/mL.
[目的]敲除禾谷镰孢(Fusarium gramiearum)中碳源代谢调控因子FgCreA,并对其营养生长、有性生殖和致病力等方面进行研究,为研究禾谷镰孢中碳源代谢机制提供依据.[方法]根据酵母数据库SGD和NCBI数据库中的序列,利用酿酒酵母中碳源代谢调控因子Migl确定禾谷镰孢中的碳源调控因子FgCreA;在NCBI数据库中检索其他物种中碳源代谢调控蛋白,使用ClustalW2软件进行多重序列比对,并用MEGA5软件构建系统进化树,同时在InterProScan网站上预测其蛋白结构域;在NCBI数据库中检索与禾谷镰孢碳源吸收相关的结构基因和真菌毒素DON生物合成的相关基因,调取起始密码子上游1 000 bp的片段,预测FgCREA基因结合位点位置;用Primer5软件设计引物,利用Split-PCR和PEG介导原生质体转化的方法进行基因敲除,并通过PCR和Southernblot验证获得FgCREA基因敲除突变体Fgcrea.根据突变体Fgcrea营养生长、有性生殖和致病力等方面的变化分析FgCREA的功能.[结果]通过生物信息学方法,明确禾谷镰孢中只有一个碳源代谢调控因子基因FgCREA (FGSG_09715),氨基酸序列416 aa,共包含两个保守的C2H2锌指结构区域.FgCreA同源蛋白在各类真菌中均存在一定程度的同源性,具有较高的保守性.禾谷镰孢碳源吸收相关结构基因(XYL2、ARA1、ICL1、PG1、SUC2)和真菌毒素DON生物合成相关基因(TRI1、TRI3、TRI4、TRI5、RI6、TRI7、TRI8、TRI10、TRI12、TRI101)启动子区均含有FgCREA DNA结合位点.采用Split-PCR技术和PEG介导的原生质体转化,通过PCR和Southern blot获得并验证了两个FgCREA基因敲除突变体.表型观察发现,突变体Fgcrea的生长速度与野生型相比下降90％;分生孢子形态正常,但产孢量与野生型相比降低88％;有性生殖阶段,突变体Fgcrea可以产生正常的子囊壳、子囊和子囊孢子,但需要比野生型长20-28 d;突变体Fgcrea对钠盐较敏感,侵染小麦穗不发病.[结论]获得禾谷镰孢碳代谢调控因子FgCreA敲除突变体,明确FgCreA参与营养生长和有性生殖,并能够影响致病过程.但是否影响相关结构基因的转录水平和DON生物合成仍需进一步验证.