重组质粒pYES-GFP mRNA在动物细胞中表达的研究

目的 提取重组酿酒酵母 mRNA,并对动物细胞进行转染,为进一步探索证明重组酿酒酵母 mRNA可以作为基因治疗物质提供依据.方法 利用酶法制备重组酿酒酵母的原生质体后提取其总RNA.对提取的总RNA纯化后利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增,鉴定GFP基因的正确无误后,脂质体转染绿猴肾细胞COS-7.在光显微镜下观察绿色荧光的发生.结果 成功制备重组酿酒酵母原生质体,克隆鉴定基因片段正确.转染细胞后有绿色荧光出现,能够表达目标基因.结论 成功制备了重组酿酒酵母原生质体,提取的mRNA能够在动物细胞中表达.证实重组酿酒酵母 mRNA可以作为基因治疗物质,能达到基因治疗的目的 .
采用顶空固相微萃取(HS-SPME)和气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对5株商品酿酒酵母和7株野生酿酒酵母所酿葡萄酒中的挥发性物质进行分析.结果表明,各葡萄酒中挥发性物质的组成成分相差不大,但在含量上存在差异,野生酿酒酵母所酿造的葡萄酒中主要挥发性物质的总含量要高于商品酿酒酵母.对于葡萄酒中主要由酵母代谢产生的3类挥发性物质—酯类、醇类和酸类,其含量最高的均为用野生酿酒酵母酿造的葡萄酒,其中以W2和W7最为突出.感官分析结果表明,C1、C2和W2的果香、花香较为突出,C4和W2具有明显的草本味,C2和W1的胡椒味较强.
为研究不同酿酒酵母发酵对骏枣果酒的影响,采用气相色谱法、分光光度法等,分析了4种酿酒酵母(BO213、EC1118、FX10和RV002)在骏枣果酒发酵过程中理化指标和抗氧化能力的变化.结果表明,4种酵母发酵过程中总可溶性固形物含量下降;酒精度逐渐上升,其中RV002酒精度上升最快;发酵10 d后,BO213、EC1118、FX10 和RV002 的酒精度分别升至11. 05% 、11. 68% 、10. 84%和11. 89% ;发酵过程中pH值和总酸没有明显变化.果酒发酵结束后以酵母BO213的甲醇含量最低;骏枣酒中的杂醇油主要有正丙醇、异丁醇和异戊醇,其中异丁醇和异戊醇含量较高,发酵过程中总杂醇油含量呈现先增加后降低的趋势,发酵结束后以BO213发酵的骏枣酒总杂醇油含量最低,质量浓度为268. 6 mg/L.发酵期间,总酚含量没有明显变化,而抗氧化能力则逐渐上升,且不同的酿酒酵母发酵的骏枣酒抗氧化能力也各不相同,以BO213最高.在4种酿酒酵母中,酵母BO213产生的甲醇和杂醇油含量最低,抗氧化能力最强,更适合骏枣果酒的发酵.
以产酸丙酸杆菌和酵母菌为菌种,进行混菌发酵制备丙酸的工艺研究,并探索最优工艺条件.通过单因素实验和正交优化实验确定了最优发酵工艺条件为:酿酒酵母为辅助菌,接种比例为Pa∶Sc=2.5∶1,接种间隔时间为8h,发酵温度为30℃,以NaOH(2mol/L)溶液为中和剂,采用自动流加方式,发酵时间为180h.优化后的混菌发酵工艺能有效提高丙酸产量,丙酸产量达24.16g/L,与纯菌发酵相比提高46.34％.
分析了重庆西部地区酿酒型糯高粱的发展现状,总结了该区域内头季及再生季糯高粱的丰产栽培技术,结合近年的大面积推广实践,提出了酿酒型杂交糯高粱的发展建议.
为了筛选可指示Verticillium dahliae致萎毒素毒力大小的指示菌.并对致萎毒素抑制指示菌生长的机理进行初步探讨,采用指示菌平板打孔法,对黑曲霉(Aspergillus niger)BF-3758、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球(Staphylococcus aurcus)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等12种具有微生物种属代表性的菌株进行筛选:采用拮抗试验、致萎试验结合显微观察的方法,初步探索了Verticillium dahliae致萎毒素对指示菌生长的抑制作用.结果表明,Verticillium dahliae粗毒素对Aspergillus niger BF-3758的生长具有较强的抑制作用,且该抑制作用和粗毒素对离体叶片的致萎作用具有一致性,并存在一定的量效关系,Aspergillus niger BF-3758菌株可以作为Verticillium dahliae致萎毒素的毒力指示菌;Verticillium dahliae粗毒素可抑制Aspergillus niger BF-3758的孢子萌发和菌丝生长,对成熟菌丝也有破坏作用.上述研究可为评价Verticillium dahliae的致病力提供一种操作简便、耗时短、费用低的生物学方法.