表达人源HPD基因对酿酒酵母孢子壁二酪氨酸层正确组装的干扰

研究人类基因4-羟苯丙酮酸二加氧酶(4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase,HPD)的表达对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)产孢过程及酵母孢子壁组装的影响.将HPD导入酿酒酵母中,比较人源化HPD酵母与野生型酵母的表型差异,分析HPD对酵母产孢及孢子壁的影响.与野生型酵母相比,人源化HPD酵母对产孢率无影响,但孢子自身荧光强度下降,乙醚敏感性增加,荧光增白剂(calcofluor white,CFW)染色荧光强度增强,该结果表明孢子壁出现缺陷,其二酪氨酸层组装过程中部分缺失.进一步研究发现,人源化HPD酵母产孢时,Hpd蛋白的催化产物尿黑酸(homogentisate,HGA)在产孢过程中会被氧化从而引起培养基颜色变化,且二酪氨酸复合物会大量泄漏至培养基中,最终导致二酪氨酸层不能正确组装.该研究结果为酿酒酵母二酪氨酸层的形成机制提供了新的认知.
甘肃是我国优质啤酒大麦生产基地之一.而啤酒大麦又是我省的主要产业支柱,也是我省啤酒工业生产的主要原料,在啤酒大麦产业化发展中,优质啤酒大麦种子被认为是产业化发展和农业增产的主要因素.目前,随着全省农业结构的调整和发展,啤酒大麦产业化也得到迅速发展,从而给啤酒大麦种子的生产、销售带来了新的机遇和发展空间.但随之而来的是,啤酒大麦产业化中种子市场存在的问题日渐突出,品种多杂乱,质量低劣,多渠道、多部门乱引乱繁,无证无照生产经营,非法倒买倒卖,以次充好,掺杂使假等问题比较突出.致使假冒伪劣种子进入市场,甚至以商品代替种子,严重影响了我省优质啤酒原料生产销售,干扰了我省啤酒大麦种子、原料市场的正常秩序,影响了我省工农业生产的健康稳步发展.
系统地比较了人工启动子 PaTEF1与天然启动子 PTEF1和 PTDH3在不同条件下的活性差别，结果表明，人工启动子 PaTEF1的活性并不是在任何条件下都高于天然启动子的活性，而与宿主、培养基以及细胞生长阶段有关。在3个宿主背景中， BY4741中 PaTEF1的活性最高，而 LX03中最低。在 YPD100中，人工启动子 PaTEF1活性分别为天然启动子 PTEF1和 PTDH3活性的1.4-4.6倍和0.9-2.0倍；而在 YPE（5%和7%）中，PaTEF1活性与 PTEF1和 PTDH3活性之比在0.7-1.3以及0.8-1.3之间。在 YPE 中培养时， PaTEF1的活性为在 YPD100中培养时的1.7-2.0倍，PTEF1和 PTDH3的活性在 YPE 中为 YPD100中培养时的2.7-7.1倍和1.3-3.4倍，启动子在 YPE 中的活性较 YPD100中更高，但人工启动子的活性变化较天然启动子更小。此外，在不同遗传背景的菌株中，启动子活性从对数期早期到对数期中期和从对数期中期到稳定期的变化趋势不同。
本试验旨在为后期反刍动物微生态制剂研制筛选出高活性酵母菌株。试验测定了6株酵母菌[产朊假丝酵母（ Cadida atilis） BY、热带假丝酵母（ Candida tropicalis） BR、热带假丝酵母B2、酿酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae） YR、酿酒酵母YC和酿酒酵母BC]产营养活性物质（β-葡聚糖、甘露聚糖、有机酸、氨基酸和多肽）的能力，并使用DPS 14．10软件运用Topsis法对试验数据进行了多指标综合分析。结果表明：热带假丝酵母BR产β-葡聚糖、甘露聚糖能力最强，其细胞壁中β-葡聚糖、甘露聚糖含量分别为80．2、60．5 mg/g；产朊假丝酵母BY产有机酸能力最强，其培养液中总有机酸含量为344．46μg/mL；酿酒酵母BC产多肽能力最强，其培养液中多肽含量为14．08 mg/dL。多指标综合分析结果表明最优菌株为热带假丝酵母BR，其产β-葡聚糖、甘露聚糖、丁二酸、谷氨酸和半胱氨酸的能力均最强，其细胞壁中β-葡聚糖、甘露聚糖含量分别为80．2、60．5 mg/g，培养液中总有机酸、总氨基酸含量分别达到312．11μg/mL、4．705 mg/g。通过6株酵母菌产营养活性物质能力综合比较分析得出最优菌株为热带假丝酵母BR。
对11家信阳市售米酒中的微生物群落组成进行了分离、鉴定.其中酿酒酵母菌占绝对优势,其次是少根根霉菌和少量细菌,同时还含有少量有害微生物.
以ABR反应器为基础,采用笼状填料,增加了缺氧与好氧段,设计了新型的ABR；以啤酒废水为处理对象,考察了新型反应器的启动过程,研究了新型反应器对废水COD的去除效果,分析了HRT、有机容积负荷对COD去除的影响,探讨了新型反应器处理过程中的pH变化及其原因,阐述了笼状填料截留和微生物的附着生长是出水SS较低的原因,出水氨氮浓度较低是增设的缺氧段和好氧段共同作用的结果.实验结果表明,其COD去除效率达96％,有机容积负荷约0.647～1.745 kg/(m3·d)；当进水量为50 L/d时,其出水水质达到啤酒废水排放标准.