CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体的构建

为了赋予工业酿酒酵母对淀粉和纤维素的降解活性,提高酿酒酵母对粗木薯粉进行酒精发酵时的酒精产率；另一方面,为了解决工业酿酒酵母不适于使用营养缺陷型筛选标记对转化子进行筛选的问题,以及避免引入抗药性标记基因带来的安全性问题,构建了以抗铜蛋白基因CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体.以载体pYES2-PMF-rDNA为基础,以新的筛选标记基因CUP1替换原有的尿嘧啶Ura-基因,得到载体pYES2M.再顺序插入葡聚糖内切酶基因eg3、葡萄糖淀糖酶基因gal和β-葡萄糖苷酶基因bgl1,构建得到以CUP1为筛选标记的酵母整合型三价表达载体pYES2M-eg3-ga1 -bgl1,其中每个基因都具有独立而完整的表达盒,包括启动子、信号肽和终止子,从而实现多基因单表达载体一次转化.
在提高输电线路抗冰性能的建设中,如果设计冰厚选择过小,则在冰雪天气中输电线路可能难以抵御覆冰的侵袭;但如果设计冰厚选择过大,则线路建造或改造的投资额将成倍提高。因此,如何合理确定设计冰厚,使得线路建设同时能够满足经济性和安全性的要求,是当前线路改造和设计新的输电线路工程工作面临的重要问题。为此,分析了线径对导线覆冰的影响机理,在自然覆冰试验站现场观测了不同直径导线的覆冰情况,结合重庆大学近年在现场观测的覆冰数据,分析得到了导线覆冰厚度的直径订正系数,通过订正系数计算得到的导线覆冰厚度与现场实测冰厚的误差〈6.8%,表明该系数能够较好地满足实测地区冰厚设计的要求。
在全面检索国内外酒类标准物质的基础上,介绍了国内外酒类标准物质研究现状,分析了我国酒类标准物质发展中存在的问题和与国际标准物质研究的差距,提出了今后我国酒类标准物质研制的重点方向:涉及到卫生检测指标的白酒、啤酒、红酒标准物质,酒中金属离子形态分析的标准物质,地理性标志产品的酒标准物质及酒类风味标准物质.
分析测定酿酒葡萄新品种两性花毛葡萄NW196成熟鲜果中的营养和功能成分,发现NW196成熟鲜果营养丰富,其中游离氨基酸含量为168.8mg/100ml、总糖为15.6g/100ml、维生素C为4.86mg/100ml、总酸为1.5g/100ml、白藜芦醇为0.41mg/100ml.两性花毛葡萄NW196是一种富含营养的葡萄酒酿酒原料.
研究了不同培养条件对冰核活性细菌冰核活性和菌体生物量的影响.结果表明:培养时间、温度、低温诱导和培养基pH值对培养液中冰核活性细菌的总活性有不同的影响.研究确定的最适发酵条件组合为培养温度18℃,培养基pH6.5,培养时间32h.
[目的]研究优选发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)混合发酵对‘爱格丽’(Ecolly)干白葡萄酒的增香作用,优化干白葡萄酒的酿造工艺.[方法]将发酵毕赤酵母菌株H5Y-28与酿酒酵母菌株F5以10∶1、4∶1、1∶1、1∶4、1∶1 0比例接种,进行模拟葡萄汁的混合发酵,并以酿酒酵母纯发酵为对照,发酵过程中监测酵母的活菌数、总菌数,建立菌体生长动力学模型.按相同接种比例进行爱格丽干白葡萄酒的发酵应用,以酿酒酵母纯发酵和添加发酵毕赤酵母胞外酶处理作为对照,酿造次年4月,对所酿葡萄酒酒样进行香气的感官分析和GC-MS分析.[结果]菌体生长动力学表明,随着发酵毕赤酵母接种比例的升高,其存活数量和存活时间明显增加,但优选菌株H5Y-28的高比例(10∶1、4∶1)接种处理会降低酿酒酵母的最大生长数量.感官分析结果表明,混合发酵有利于增强‘爱格丽’葡萄酒的果香和花香,尤其是热带水果香气,但高发酵毕赤酵母接种比例(10∶1)会给葡萄酒带来较强的生青味,而酒样1∶1、4∶1仅引入较弱的生青味.挥发性香气成分分析结果表明,品种香气成分的含量随着发酵毕赤酵母接种比例的升高而增加,尤其是萜烯类和C13-去甲类异戊二烯化合物.此外,添加胞外酶能显著提高葡萄酒品种香气的含量,尤其是C13-去甲类异戊二烯化合物的含量(高于纯酿酒酵母发酵酒样9 0％).混合发酵显著增加了酒样中发酵香气中的乙酸酯、C6-C12脂肪酸及其酯类、异戊醇与苯乙醇的含量.与单一酿酒酵母发酵酒样相比,1∶1接种比例有助于提高酒样中26％品种香气成分和39％发酵香气成分的含量,尤其是显著地提高了中链脂肪酸乙酯的含量(4 0％).[结论]毕赤酵母与酿酒酵母1∶1接种处理不影响酿酒酵母生长,且具有较强的增香酿造潜力.