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以PCR为基础的基因破坏技术在酿酒酵母中的应用

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2024-07-08 阅读:844
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种已知全序列的重要模式生物,具备单双倍体特性、乙醇耐受性强、高效体内重组的能力、可操作性强等优点.同时酿酒酵母是第一个完成基因组测序的真核生物,各种遗传操作技术业已成熟,因此它在基因操作和生物能源方面是首选的研究对象.以PCR为基础的基因破坏方法第一次在酿酒酵母中被报道后,其方法和技术得到了迅速的改进和发展,目前在酵母中已经广泛应用.文章主要介绍这种方法在酿酒酵母中应用的基本原理和研究方法,以及与其他传统基因破坏方法相比较的优缺点、存在的问题等.说明以PCR为基础的基因破坏方法能够避免繁琐的基因克隆操作,省时、省力、方便.
目的:探讨酒精诱发乳腺癌的分子机制。方法采用Realtime PCR方法分析酒精对雌激素受体α( ERα)不同表达状况的乳腺细胞系、酒精联合雌激素MCF-7细胞系以及酒精对转染ERαsiRNA的MCF-7细胞系的RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)的转录水平。结果酒精对ER+乳腺细胞系tRNAs、5S rRNA上调水平(7~8倍)明显高于ER-乳腺细胞系(2~3倍)( P<0.01);酒精和雌激素联合处理对MCF-7细胞系tR-NAs、5S rRNA的转录水平的上调作用(12~14倍)明显高于酒精(7~8倍)或雌激素(2~3倍)单独作用组( P<0.01);酒精对转染ERαsiRNA组MCF-7细胞系(2~3倍) tRNAs、5S rRNA的转录水平的上调作用明显低于未转染组(6~8倍)(P<0.01)。结论酒精诱发乳腺癌过程中RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录水平的上调依赖于ERα的表达。
为了探索以贝达为砧木的几个酿酒葡萄品种在焉耆盆地的生态气候适应性及其应用价值,从而为该地区酿酒葡萄筛选适宜的砧穗组合提供理论依据,用以贝达为砧木的9个酿酒葡萄栽培品种为试验材料,研究贝达砧木对不同酿酒葡萄品种生长势、光合特性和叶绿素荧光参数的影响.结果表明,酿酒葡萄品种中维代尔的穗砧比为1.05,最接近于1,且坐果量最高,达到15.00穗/株.赤霞珠、梅鹿辄、维代尔、北红有较高的净光合速率(Pn)、最大光化学量子产量(Fv/Fm)、PSⅡ的潜在活性(Fv/Fo)、PSⅡ实际光化学效率(ΦPSI)及较低的非光化学猝灭系数(NPQ).通过主成分分析进一步发现不同酿酒葡萄生长情况由强到弱的顺序为:梅鹿辄>维代尔>北红>赤霞珠>烟七三>黑比诺>北玫>白雷司令>霞多丽.综合分析认为以贝达为砧木的梅露辄、维代尔、北红和赤霞珠具有较强的亲和性,光合性能良好,对当地环境条件适应性强.
我国果酒业生产技术条件落后,缺乏权威性果酒标准,缺乏适于酿造加工的水果品种,销售工作缺乏创新.应加快果酒国家标准的制定,培育果酒消费市场,强化市场营销,实施品牌发展战略,采用先进的技术工艺.
在工厂规模上对高浓酿造后稀释啤酒的口感协调性进行了研究.利用SPME-GC法和HPLC法对两种规模上不同稀释率下的成品酒风味物质进行了检测分析,同时运用模糊综合评价方法对成品酒的口感协调性进行了评估,最终初步确立了制备不同浓度的淡爽型高浓后稀释酒的较佳稀释工艺.
为改善山葡萄酒的风味,对其苹果酸—乳酸发酵工艺条件进行优化.结果表明,山葡萄酒苹果酸—乳酸发酵的最佳工艺条件:初始pH 3.00,温度20℃,接种量4 mL/100 mL,含糖量10.7 g/L.在最佳工艺条件下对东北山葡萄酒进行二次发酵,制品pH值相对于原发酵葡萄汁升高0.19±0.05,总酸度(以苹果酸计)相对于原发酵葡萄汁降低(2.67±0.10)g/L,缓解了山葡萄原酒的酸涩味,增加了适口性.

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