酿酒葡萄内生真菌群落及抗菌活性测定

从酿酒葡萄(Vitis vinifera. L)植株的各组织中共分离得到462株内生真菌,通过形态鉴定、排重、按比例缩取从中选取出64株内生真菌.采用ITS排序、系统树构建的方法对64株真菌的种属地位及发育关系进行了研究,并对植物病原真菌生长抑制能力进行了测定.系统发育树分析表明酿酒葡萄内生真菌分布于20个属,其中交链孢霉(Alternaria) 17.24%,青霉(Penicillium) 15.52%,镰刀菌(Fusarium)10.34%,曲霉(Aspergillus)、Discostroma、赤霉菌(Gibberella)、Passalora、Pestalotiopsis各5.17%,交链孢霉、青霉、镰刀菌是其中的优势种群.对植物病原真菌有抗性的菌株分布于15个属,其中镰刀菌属的6株菌对3种指示菌均有抑制作用,镰刀菌是酿酒葡萄植株主要抗植物病原真菌的活性物质来源之一.
在2.6L全自动发酵罐中对人α2a干扰素重组酵母的补料分批培养过程作了初步研究.结果表明,培养过程中待葡萄糖耗尽时流加葡萄糖,并维持低糖浓度;在培养10h～20h时,恒速流加20mg/L的腺嘌呤,能较大幅度提高表达水平,生物活性从原工艺的3.1×109IU/L提高至1.3×1010IU/L.表达期pH值对生产水平有很大影响,宜控制在5.0～5.3.
发酵过程中酵母代谢产生的有机酸会影响发酵效率.以葡萄糖为底物,在自动发酵罐中进行了酿酒酵母间歇乙醇发酵实验,研究了发酵过程中酵母的主要代谢副产物中有机酸的种类及其对乙醇发酵的影响.结果表明,发酵过程中酵母代谢的主要有机酸是琥珀酸、乳酸和乙酸.3种酸的总量随温度(25~40℃)升高或pH增大(3~6)呈上升趋势,最大值可达5.78 g/L,占产物的23.3%.通过外源投加有机酸实验发现,3种代谢有机酸对酵母抑制作用的大小并不完全由其酸性决定,还与其进入细胞的难易程度等相关.通过外源投加有机酸实验结合发酵过程中去除有机酸实验可以确定,对乙醇发酵的影响由大到小依次为乙酸、琥珀酸和乳酸,且三者之间对乙醇发酵无明显的协同抑制效应.乙酸是发酵过程中产生主要抑制作用的代谢有机酸,2 g/L的乙酸可引起菌体浓度明显下降,4 g/L的乙酸即可引起乙醇得率下降86.7%.
葡萄酒酒精发酵后期,酿酒酵母果糖利用能力与酒精发酵中止和发酵不彻底密切相关,而且残余果糖还可能带来微生物污染和酒体失衡的危险.从酿酒酵母己糖跨膜转运、己糖胞内磷酸化及发酵条件(葡萄糖浓度、乙醇和温度)对果糖利用影响等方面的研究进展进行了综述,对筛选和构建高果糖利用优良葡萄酒酿酒酵母研究,以及生产中合理控制酒精发酵过程具有重要指导意义.
目的:为充分利用洋葱资源,制得具有良好口感与保健功能的洋葱酒.方法:以黄皮洋葱为原料,选择不同的前处理方式对洋葱进行前处理并采用响应面法对洋葱酒的发酵工艺进行优化.结果:洋葱在539W微波条件下处理20min,按料液比1:3(g/mL)打浆,在发酵温度25.3℃、酵母菌接种量0.84%、发酵时间48.36h条件下发酵,制得洋葱酒乙醇体积分数9.7%,总黄酮的浸出率为65.12%.多元回归分析结果显示,发酵温度、酵母菌接种量、发酵时间与洋葱酒酒精含量和黄酮浸出率之间回归模型极显著,可用于实际生产预测.结论:微波处理可明显除去洋葱的葱臭味,并得出了洋葱酒发酵的最优条件.
磷脂酸磷酸酶(PAP)是一类重要的去磷脂酸酶,该酶的低水平表达会降低酿酒酵母细胞对外源脂肪酸的耐受性,从而阻碍了改造酿酒酵母使其生产多不饱和脂肪酸的研究进程.本实验克隆获得磷脂酸磷酸酶的编码基因PAH1,构建了过表达PAH1的酿酒酵母重组菌株BY-PAH.限氮发酵72 h后,重组菌株BY-PAH胞内油脂浓度较对照菌株BY4741提高了49％.当在培养基中添加棕榈油酸浓度从0.25 mmol/L提高到1 mmol/L时,重组菌株BY-PAH的胞内油脂浓度从26.7％提高到38.5％.该结果表明,磷脂酸磷酸酶通过其自身的去磷酸化活性能够将更多的脂肪酸整合到甘油三酯TAG上,使酿酒酵母对脂肪酸有更高的耐受性.