"黑比诺"葡萄不定芽离体再生的研究

研究多种因素对欧亚种酿酒葡萄品种"黑比诺"叶片、叶柄和茎段不定芽再生的影响.不同生长调节物质及浓度对其再生影响显著,其中以茎段在MS+BA 5.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1培养基上再生效果最好,再生率为62.5%;叶柄在MS+BA 5.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1培养基上再生率达到20%,而叶片始终未能诱导出芽.另外,暗培养时间及不同节位对茎段不定芽再生有明显影响.
红曲霉对红曲黄酒的色、香、味及其功能性组分至关重要.然而,红曲霉在酿酒过程中被抑制,其抑制机理并未明确.本研究采用PCR-DGGE与qPCR技术相结合的方法,对平湖红曲黄酒传统酿造过程中的优势真菌菌群动态进行定性、定量分析,并根据红曲霉的菌量变化推测可能原因,同时构造相应的体系进行验证,寻找影响红曲霉生长的关键因子.结果表明:传统酿造过程中,红曲霉和酿酒酵母是优势菌,且随着酿造时间的延长,红曲霉的菌量逐渐降低;验证体系表明溶氧量的暂时减少、红曲米的物理束缚和红曲浸泡液中的物质并不会显著抑制红曲霉的生长,而酒精度的增加是影响红曲霉生长的关键因素;传统酿造过程进一步验证酒精度的变化与红曲霉生长的关系,发酵初期的酒精度(0～4％,体积分数)对红曲霉无影响,而随着酒精度的增加,红曲霉的生长逐渐受到抑制,至发酵后期的酒精度(17％,体积分数)对红曲霉的抑制作用明显.
多不饱和脂肪酸因其在食品和医药领域的广泛作用而得到人们极大的关注，当前利用微生物发酵生产多不饱和脂肪酸具有诸多优点，由于酵母生产迅速且生物量较高，利用酵母生产多不饱和脂肪酸已成为人们关注的热点。本文综述了代谢工程改造酵母生产多不饱和脂肪酸的研究进展，以常规酵母-酿酒酵母和非常规酵母-解脂耶氏酵母为例，介绍了酵母菌中多不饱和脂肪酸的代谢途径、酵母产油脂的生化机制、代谢工程改造酵母产多不饱和脂肪酸以及不饱和脂肪酸积累对酵母耐受性的影响。以后研究工作的重点是进一步加强对酵母生产多不饱和脂肪酸的机理研究，并以此为来指导代谢工程改造酵母生产多不饱和脂肪酸。
目的:以整合型载体pRS303K为框架,以来源于拟南芥的4-香豆酰辅酶A连接酶基因(4cl)和巨峰葡萄的白藜芦醇合酶基因(rs)为目标基因,采用一步等温法构建了表达白藜芦醇的整合型酵母表达载体pRS303K-T4C-TRC.方法:采用LiAc/SS carrier DNMPEG转化法把表达载体成功转化酿酒酵母工业型菌株EC1118,经筛选和PCR鉴定获得酵母工程菌株EC 1118-303K-T4C-TRC.酵母工程菌株采用添加和不添加抗生素的发酵培养.结果:在培养基添加抗生素和不加抗生素的发酵液中白藜芦醇的含量分别为3.4110 mg/L和3.4710 mg/L,两者差异不显著.结论:两个关键酶基因成功整合到酵母的染色体基因组中并得到表达,工程菌株在传代中不受选择压力影响,稳定组合表达白藜芦醇.
为探讨相同加工原料下六大茶类的抑菌效果,以春季碧香早的1芽2叶茶鲜叶为原料,将其固定及分别加工成绿、黄、黑、白、青、红六大茶类,采用牛津杯法比较研究7个样品对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)3种细菌以及黑曲霉(Aspergillus niger)、啤酒酵母(Saccharom yces cerevisiae)2种真菌的抑菌活性,并利用96孔细胞板及二倍稀释法检测7个样品的最低抑菌浓度(MIC)与最低杀菌浓度(MBC).结果表明:7个样品对3种细菌均有抑制作用,对2种真菌的抑制效果不明显;7个样品对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的抑菌圈大小均呈现出固定样＞绿茶＞黄荼＞黑茶＞青茶＞白荼＞红茶的特性,最低抑菌浓度呈现出红茶＞青荼、白茶＞黑茶、黄荼、固定样、绿茶的特性,最低杀菌浓度均呈现出红茶＞青茶、白茶、黑茶、黄荼＞固定样、绿茶的特性;绿茶和其他茶类之间、红茶和其他茶类之间的抑菌效果有显著性差异(P＜0.05).
γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH Ⅰ)是合成谷胱甘肽的关键酶.通过构建GSH Ⅰ活性较高的重组菌来提高合成GSH的能力.利用PCR技术扩增获得了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)2-10515的gshⅠ基因,构建原核表达载体pET-28a-gshⅠ,转化到Escherichia coli BL21(DE3)中,重组菌经诱导表达后,测得GSH Ⅰ的酶活力为46.09U/mg湿菌,活性较高.进一步利用生物信息学方法分析和预测GSH Ⅰ基因的序列和蛋白结构,为在基因水平上提高该酶的表达量和活性提供了理论依据.