微生物乙酰辅酶A羧化酶及其抑制剂的研究进展

乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACCase)在微生物生长和脂肪酸合成代谢中发挥着重要作用.本文系统介绍了微生物ACCase的分类、结构与功能、代谢作用和抑制剂研究等方面的进展.微生物ACCase类型主要分为真核型(同质型)和原核型(异质型)两大类,分别以酿酒酵母ACCase和大肠埃希菌ACCase为代表.结构与功能研究主要集中在对异质型ACCase的BC和CT亚基的晶体学、作用位点等方面.许多研究表明ACCase在微生物的生长和脂肪酸合成中发挥着关键作用,ACCase活性减弱和丧失会导致菌体生长减缓或无法存活,脂肪酸的合成也明显减弱.面对临床上越来越多的抗药菌,以微生物ACCase及其亚基作为抗生素筛选靶标,成为筛选和合成新抗生素的重要方向,目前己取得一定进展.
研究了不同麦芽品种的脂质氧化相关指标分布特点及性能差异,为优选麦芽,提高啤酒新鲜度提供依据.基于溶液模型,研究确定了单酚物质阿魏酸、儿茶酸、咖啡酸能抑制脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX)的催化作用,金属离子能促进LOX酶作用;随后测定啤酒厂6种常用麦芽品种的11项脂质氧化指标,方差分析显示,不同麦芽品种的反-2-壬烯醛(trans-2-nonenal,T2N)、壬烯醛潜力(nonenal potential,NP)、单酚、金属离子之间存在显著差异;判别分析显示,加麦Copeland、加麦Metcalfe和甘啤在脂质氧化指标上较接近;基于主成分分析,建立脂质氧化综合评价指标,优选出脂质氧化程度低的麦芽.
通过启动子优化、宿主筛选，构建了C端带His-tag的胰凝乳蛋白酶类蛋白酶SplB表达载体，成功实现了SplB在枯草芽孢杆菌中的重组表达，对纯化的重组SplB进行酶学性质研究，并实现了重组蛋白酶SplB在重组蛋白Prx标签切割中的应用。结果表明，以枯草芽孢杆菌ATCC6051Δ10为宿主，通过启动子P43介导的重组蛋白酶SplB表达活力最高（10.24 U/mL）。通过亲和层析纯化了重组表达的SplB，并进行酶学性质研究，其最适温度为40 ℃，最适pH值为8.5，且具有良好的温度和pH值稳定性。在离子浓度较低情况下，Co2＋对重组SplB活力有促进作用，Mg2＋、K＋不影响酶活力；而Cu2＋、Zn2＋、Ni＋离子抑制SplB活力；十二烷基硫酸钠极大抑制重组SplB活力。将重组SplB应用于切割重组蛋白Prx的标签，结果表明，重组SplB具有WELQ肽段标签切割作用，并且SplB浓度越高，目标条带越浓。本研究为优化SplB的重组表达及在食品、医药领域的应用提供支持。
通过测定－20 ℃冷冻条件下无冰衣组、15%镀冰衣组和25%镀冰衣组南美白对虾的感官评分、解冻损失、蒸煮损失、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)含量、盐溶蛋白含量及肌苷酸(inosine-5'-monophosphate,IMP)关联物各比值,研究镀冰衣处理对冻藏南美白对虾品质的影响.通过分析IMP关联物各比值(K、Ki、G、P、H及Fr)与主要鲜度指标间的相关性,探讨更适宜作为－20 ℃冷冻条件下镀冰衣南美白对虾品质评价的指标.结果表明:随着贮藏时间的延长,3 组南美白对虾的解冻损失、蒸煮损失和TVB-N含量均呈明显上升趋势,盐溶蛋白含量显著下降,25%镀冰衣组南美白对虾的品质始终优于无冰衣组和15%镀冰衣组;根据各指标间的Pearson相关性分析,K、Ki、G、P、H及Fr值中,K值更适合用于评价该贮藏条件下南美白对虾的整体质量;无冰衣组、15%镀冰衣组和25%镀冰衣组分别在贮藏第12、16、16周感官不可接受,镀冰衣能够有效延长冻藏南美白对虾的贮藏期.
通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因，将其与酿酒酵母细胞壁蛋白d凝集素基因在读框内融合，构建得到表面展示载体pBA-AG，进一步将该重组质粒通过遗传转化，整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中，获得了β-淀粉酶经过仅凝集素锚定信号结合到细胞壁上的重组酵母。重组酵母表面展示的β-淀粉酶活力为131U／g干细胞。对展示的β-淀粉酶酶学性质研究表明，其最适反应温度为50℃，最适作用pH为5．0，与游离酶相比，其温度稳定性和pH稳定性均得到提高。本研究利用α凝集素系统首次将β-淀粉酶成功展示在酿酒酵母表面，为以酿酒酵母为基础的全细胞催化剂研究与应用打下了一定基础．
本发明公开了一种馥郁浓香型白酒的酿造生产工艺，该工艺是清香、浓香、馥郁香等三种香型白酒酿造工艺的融合与调整，以“十字梗”老窖泥池底局部青石板池壁的窖池作为发酵容器，采用多粮原料、小曲堆积、大曲入池、清蒸续糟、分层起糟、分层馏酒、双轮底发酵等酿造工艺，所产馥郁浓香型白酒经分类摘取，分别贮存，长期陈酿，精心勾调而成。本发明工艺方法酿造生产的这种馥郁浓香型白酒，多香多味，诸味协调，兼有清香型白酒的“清、正、甜、净”，又偏重于有浓香型白酒的“绵厚柔顺、窖香优雅”，同时具有馥郁香型白酒的“优雅细腻、回味悠长”等特点，可以满足白酒香型多样化融合的市场需求。