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酵母α-半乳糖苷酶组成型表达基因的重组构建及转化

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2024-07-24 阅读:410
用PCR方法从酿酒酵母AH109中扩增出α-半乳糖苷酶MEL1基因片段,与乙醇脱氢酶组成型启动子重组后构建成表达重组质粒pGAD-GAL.将重组质粒pGAD-GAL转化不带α-半乳糖苷酶基因的酿酒酵母后,在预先涂布有X-α-Gal的亮氨酸缺陷培养基(SD/-Leu)平板上选择到蓝色菌落.实现了α-半乳糖苷酶在酵母内的组成型表达.
葡萄汁中酵母可同化氮的含量和组成,不仅影响酵母生长和酒精发酵,还对葡萄酒中高级醇、支链酸、酯类等发酵香气物质的积累起决定性影响.支链氨基酸、芳香族氨基酸等由酿酒酵母通过Ehrlich路径代谢生成相应的高级醇及酸,高级醇和酸与糖代谢及脂肪酸代谢产物结合生成酯类,构成发酵香气的主要成分.合理的葡萄汁氮源组成和外源添加氮源对葡萄酒发酵过程中优良香气物质的积累,减少不良香气物质,提高酒的感官品质有重要意义.本文总结了酵母可同化氮量与发酵香气积累相关的研究成果,综述酿酒酵母氮代谢产生香气物质的路径及其基因表达调控的研究进展.
本试验研究酿酒酵母培养物作为饲料添加剂时,在过量添加的情况下对内仔鸡的影响机制.选取144只公母各半,健康状况良好,体重相近的1日龄AA肉仔鸡,随机分为6组,每组4个重复,每个重复6只鸡.对照组饲喂基础日粮,其他试验各组日粮按不同比例添加酵母培养物,其添加剂量分别为0.03%、0.06%、0.12%、0.24%以及0.48%,试验期为42 d.结果表明:与对照组相比,日粮中添加0.03%以上酵母培养物会显著降低1~42日龄内AA肉仔鸡的平均日增重(P<0.05)与前期(18~21 d)氮素表观沉积率,提高料肉比(P<0.05);添加0.06%以上酵母培养物会显著降低后期(39~41 d)氮素表观沉积率;添加剂量在0.03%~0.24%范围内可以提高血清中尿素氮与球蛋白水平,降低碱性磷酸酶水平;酵母培养物的过量添加也会降低仔鸡小肠粘膜发育,降低绒毛高度与VCR比值.
构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2, 克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec. 该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.
以野生山葡萄83个株系及种内、种间杂交37个组合146个后代株系,共229个株系的浆果为实验材料,用分光光度--比色法测定浆果单宁含量.单宁含量(mg/100ml)总趋势为:野生山葡萄(90.30±0.36)>山葡萄×山葡萄(69.18±0.32)>(山葡萄×欧亚种葡萄)×山葡萄(46.07±0.30)>(山葡萄×欧亚种葡萄)×欧亚种葡萄(34.54±0.23)>山葡萄×欧亚种葡萄(26.02±0.26).确定了山葡萄种内和种间种杂交育种亲本浆果单宁含量指标,为选育优良酿酒葡萄新品种提供了实验参数,保证了酿造具有独特风格和品质的山葡萄酒的质量.
为探明铁皮石斛超微饮片与传统饮片对微生物生长的影响,明确中药超微饮片的优越性,选用生长受铁皮石斛影响明显的2种微生物,通过液体培养比浊法研究了铁皮石斛超微饮片与传统饮片的作用效果.结果表明,铁皮石斛超微饮片和传统饮片对酿酒酵母的生长都有促进作用,且超微饮片的效果优于传统饮片,其中0.08~0.12 g/mL铁皮石斛超微饮片对酿酒酵母生长的促进效果与传统饮片相比差异达显著或极显著水平.铁皮石斛超微饮片和传统饮片对大肠杆菌的生长都有抑制作用,并且超微饮片的效果强于传统饮片,其中0.04~0.08 g/mL铁皮石斛超微饮片对大肠杆菌生长的抑制效果与传统饮片相比差异达显著或极显著水平,0.10 g/mL铁皮石斛超微饮片对大肠杆菌生长的抑制效果与传统饮片相比没有显著性差异.可见,超微饮片的有效物质浸出率高于传统饮片,超微技术有利于中药成分的溶出.

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