酿酒酵母表面展示表达的β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶学性质研究

固定化酶是酵母表面展示技术的1个重要应用方向.本文应用食品级酵母展示表达系统进行表达,成功获得具有生物活性且固定在酿酒酵母细胞表面的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,并测定其酶学性质.结果表明,与分泌表达的自由酶相比,展示表达的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质发生了改变.其最适温度为60℃,热稳定性增强.50℃保温3h,对酶活几乎没有影响.60℃保温1h后的酶活为初始酶活的129.2％.随着该温度下保温时间的延长,酶活迅速下降,保温3h后的酶活为初始酶活的64.6％.70℃保温1h,酶活增加到初始酶活的109.2％;1 h后酶活开始下降;70℃保温3h后残留酶活仅为初始酶活的35.8％.展示表达的β-1,3-1,4-葡聚糖酶最适pH为6.0,在pH 4～7范围内酶的稳定性较好.
比较不同溶剂提取方法对淡竹和箬竹抑菌能力的影响,采用抑菌圈法测定淡竹和箬竹不同溶剂提取物对5种供试菌的抑菌作用.结果表明,淡竹、箬竹水提取物对白色假丝酵母菌、酿酒酵母菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用,抑制作用效果不明显;淡竹、箬竹丙酮提取物对5种供试菌均表现抑制作用,淡竹丙酮提取物抑制效果为枯草芽孢杆菌＞大肠杆菌＞金黄色葡萄球菌=酿酒酵母菌＞白色假丝酵母菌,箬竹抑菌效果是大肠杆菌＞枯草芽孢杆菌＞白色假丝酵母菌＞金黄色葡萄球菌＞酿酒酵母菌;淡竹、箬竹乙酸乙酯提取物对5种供试菌均表现出较强的抑菌作用,淡竹乙酸乙酯提取物平均抑菌圈直径为23.7mm,箬竹平均抑菌圈直径为22.8mm.两种竹叶水提取物抑菌效果较差,丙酮、乙酸乙酯能比较有效地从竹叶中提取具有抑菌活性的化学物质,其中乙酸乙酯的提取物抑菌效果最好,说明溶剂影响竹子提取物的抑菌能力.
从杨梅果园周边环境及杨梅自然发酵醪中共分离得到152株酵母菌,通过TTC显色法、杨梅汁杜氏管法及三角瓶发酵法进行三级筛选,共得到4株酵母在产气性能、色泽及风味方面比较突出,分别为110号、147号、151号及152号,经过分子生物学鉴定,确定4株菌分别为克鲁弗毕赤酵母、有孢汉逊酵母、库德里阿兹威氏毕赤酵母和酿酒酵母.将筛选到的4株酵母进行耐受性测试,其中152号耐受性最好,在酒精含量18％ vol、SO2含量250 mg/L、糖含量50％和pH1.5的条件下均有较好的产气性能,非常适合杨梅果酒的酿造;110号、147号和151号可用于生产低醇果汁饮料、酿造低酒精度果酒或与产酒力高的果酒酵母混合发酵时增香.
通过建立高压脉冲电场解冻装置,进行了冰的解冻试验.利用实验数据分析结果,揭示了在高压脉冲电场作用下对冰水相变的加速作用及其规律,并对此规律的机理进行了探讨.
一种白酒的勾兑、制造方法是利用全国乃至世界各地的白酒,至少99种,多至10000种,混合、勾兑而成一种新的品种的白酒。其方法简单、易行,经济效益可观。用此方法勾兑、制造出的白酒是一种理想的珍贵品种白酒,有利于人们日益增长的需求。
根据裂殖酵母的β-葡萄糖苷酶的基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从裂殖酵母中提取总RNA,然后反转录扩增得到β—葡萄糖苷酶基因（bglA）,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYD1-bglA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,提取酵母菌的DNA通过PCR扩增证实了β-葡萄糖苷酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％ (w/v)的半乳糖诱导48h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于裂殖酵母的β—葡萄糖苷酶展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析研究.