绿色木霉葡聚糖内切酶cDNA基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

用L-山梨糖诱导绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711纤维素酶基因的转录,提取其总RNA反转录获得cDNA.PCR扩增葡聚糖内切酶Ⅰ(EG Ⅰ)和葡聚糖内切酶Ⅲ(EG Ⅲ)的cDNA基因,将其克隆到酵母载体中,构建产生纤维素酶的酿酒酵母工程菌.重组菌株能够识别EG Ⅰ和EG Ⅲ自身携带的信号肽而将表达产物分泌到胞外,故可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子.重组菌株表达的EG Ⅰ酶活在诱导70h时达到最高(为0.08U/ml),表达的EG Ⅲ酶活在诱导60h时达到最高(为0.03U/ml).
为实现处理焦化废水的颗粒污泥的快速培养,进而高效处理焦化废水,在22～ 27℃环境温度下,平行运行2个EGSB反应器,用焦化废水驯化处理啤酒废水颗粒污泥,对微氧运行(与厌氧对比),有机营养物添加(厌氧、微氧运行)、无机碳营养添加(厌氧、微氧运行)3种情况时的污染物质(COD)去除效果进行实验研究.研究结果表明:与厌氧相比,微氧运行能够明显强化焦化废水中毒性污染物质的去除.在焦化废水驯化初期,多次水质冲击(1 500 mg·L-1 COD,220 mg·L-1氨氮→2 000 mg·L-1COD,70 mg·L-氨氮→700 mg·L-COD,104～220 mg·L-1氨氮),微氧运行时COD平均去除率为24.8％(厌氧运行时仅为5.16％).微氧运行虽然保证了污泥床的有效膨胀,但COD去除率的提高仍然有限.有机营养物的添加并没有使得COD去除率大幅提高,厌氧时为22.8％,微氧时为37.5％.无机碳营养(碳酸氢钠)的添加能够大幅提高焦化废水中COD去除率,厌氧时提高到53.8％;微氧时提高到75.4％,增幅分别达到31.0％和37.4％.微氧运行条件与无机碳营养的耦合作用能强化焦化废水中COD的去除,快速驯化培养处理焦化废水颗粒污泥.通过给处理焦化废水微氧EGSB反应器内添加碳酸氢钠,40 d就能完成高活性颗粒污泥的培养,高效处理焦化废水中各种污染物质.进水COD、酚类、氰化物和硫氢化物分别为54.8-1 927 mg·L-1,10.1-154.3 mg·L-1,0.9-57.8 mg·L-1和66.7-340.4mg·L-1、进水流量1.2L·h-1、HRT10 h时,COD去除率达到78％～ 86％,酚类、氰化物、硫氢化物的平均去除率分别高达98.9％、93.1％和97.5％.
采用氯化银比浊法直接测定啤酒中微量的氯离子,研究了测量波长、稳定时间、酸度、稳定剂对结果的影响.最佳实验条件为:检测波长440nm,线性范围0～6μg/mL,方法检测限为0.0321μg/mL.该法测定啤酒中不同浓度微量氯离子的相对标准偏差小于0.5%,加标回收率为97.7%101.3%.结果表明,该法准确、快速、简便,其它的常见离子无干扰,适用于啤酒厂的日常检测.
采用不同质量分数的冰盐处理南美白对虾,以剥壳耗时、对虾的挥发性盐基氮含量、ATP酶活性、硬度、弹性、壳肉间拉力、温度变化趋势为测定指标,结合感官确定了南美白对虾冰盐预处理剥壳最佳处理条件为:盐质量分数为4％的冰盐处理0.5h,此时虾体温度为-0.05℃,剥壳时间为7.72min,虾肉弹性为3.71 mm,硬度为10.43N,壳肉间拉力为1.7N,挥发性盐基氮含量为4.79mg/100g,ATP酶含量为0.063U/mg.剥壳后虾肉完整,肉质好,色泽、气味正常.本研究将为南美白对虾机械剥壳提供良好的理论依据,为虾类大规模深加工提供技术支撑.
为探究副溶血性弧菌生物被膜形成机制，在菌株生理特性分析的基础上，结合转录组测序技术，对生物被膜形成过程中的基因表达调控规律进行探究。实验测定了2 株被膜差异菌株（ATCC 17802和VP-0）的胞外多糖、胞外蛋白、信号分子AI-2、细胞渗透性和生物被膜微观形态等生理指标，研究被膜差异菌株的动态形成过程。结果显示：供试菌株生物被膜形成过程，0～12 h为可逆黏附阶段，12～48 h为不可逆黏附和微菌落形成阶段，48～72 h为成熟阶段，72～144 h为解离阶段。ATCC 17802胞外多糖和蛋白在生物被膜成熟期分泌量分别是VP-0的1.67 倍和2.3 倍，在生物被膜形成过程中信号分子含量相差不显著（P＞0.05），激光共聚焦显微镜显示ATCC 17802呈现更聚集状态。根据转录组测序结果分析可知，3 个处理组（72 h vs 8 h、48 h vs 8 h和72 h vs 48 h）分别鉴别出802、1 061 个和267 个显著性差异表达基因，其中分别有506、655 个和96 个差异基因下调，296、406 个和171 个差异基因上调。这些差异主要体现在能量代谢、鞭毛系统、转运系统等与生物被膜形成有关的方面。本实验详细划分了副溶血性弧菌生物被膜的形成阶段，也为生物被膜动态调控中的基因调控过程提供了理论基础。
通过研究青蛤凝集素CSL与酵母细胞壁肽聚糖的相互作用及CSL与酿酒酵母细胞结合后其表面积的变化,分析CSL对酿酒酵母细胞作用的影响.结果表明,固相吸附测试中,CSL可与酵母细胞壁肽聚糖结合,两者的结合具有浓度依赖关系,该结合位点受甘露糖(D-Mannose)及N-乙酰-D-半乳糖胺(N-acetyl-D-galactosamine)的抑制.CSL与酿酒酵母细胞壁相互作用,导致了它的表面积发生了改变,这表明其细胞壁发生了变化.对照组与CSL添加组两组酵母菌内的Ca2+含量未发生明显变化.扫描电镜观察表明,对照组酵母细胞表面较圆润光滑,CSL添加组酵母细胞表面有较多赘附凸起.研究结果为CSL促进酵母发酵能力的机理提供基础数据.