酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究

本研究将酿酒酵母穿梭质粒pESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子,构建了组成型双启动子表达载体pESCD,再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到pESCD的Sal Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点之间,构建了组成型表达UGT76G1的重组质粒pESCD-UGT.将pESCD-UGT转化到酿酒酵母YPH499中进行表达,结果确定该重组酵母在SD-L液体培养基培养24h达到稳定期,菌体培养8h蛋白表达量高,选用1％的甲苯作为重组菌全细胞催化的通透剂时,催化15h产生288mg/L的莱鲍迪甙A,其产量是对照组的5倍.
随着当前社会现代化建设的快速发展,很多传统行业都可以运用现代化的科学技术实现产业转型.而在酿酒行业中更是如此,传统的固态酿酒技术已经无法满足当前迅速膨胀的市场需求,应当结合工业化的生产技术进行改良.因此本文针对固态酿酒智能化装备的相关技术进行分析和探索.
通过PCR分析发现Kluyveromyces delphensis中存在与酿酒酵母相似的snR72～78 snoRNA基因簇.对该基因簇进行序列测定并与酿酒酵母比较分析,发现基因簇中各个snoRNA编码区具有一定的保守性,但是基因间隔区却有完全不同的序列,这表明RNaseⅢ对snoRNA前体加工的识别信号存在于各snoRNA基因间隔区的高级结构中.进一步对另外4种酵母进行PCR分析,结果表明snR72～78 snoRNA基因簇是一种保守的基因组织,普遍存在于各种酵母中.
旨在探索益生性酿酒酵母菌及其灭活菌对绵羊瘤胃外植体内β-防御素-1 (sheep beta-defensin-1,S BD-1)表达的影响.本研究建立了绵羊瘤胃外植体培养方法,将不同浓度(104、105、106、107、108、109 CFU· mL-1)的酿酒酵母菌及其灭活菌与外植体共培养24 h后,通过qPCR和ELISA方法检测瘤胃外植体内SBD-1 mRNA和蛋白的表达变化,以分别确定活菌及其灭活菌诱导SBD-1表达最高的菌液浓度;然后用该浓度的活菌及其灭活菌对瘤胃外植体进行不同时间(2、4、8、12、16、20、24 h)的刺激,同样用qPCR和ELISA方法检测瘤胃外植体内SBD-1 mRNA及蛋白的表达变化,从而筛选出活菌及其灭活菌诱导SBD-1表达的最佳时间.结果表明,益生性酿酒酵母菌及其灭活菌均能显著促进绵羊瘤胃外植体SBD-1的表达(P＜0.05).当酿酒酵母菌浓度为107 CFU·mL-1、灭活菌浓度为108 CFU·mL-1分别诱导绵羊瘤胃外植体16 h时,SBD-1表达量分别达到最大,且二者与对照相比均呈极显著差异(P＜0.01).在最佳诱导条件下对比二者的诱导效果,酿酒酵母菌活菌高于其灭活菌.因此,益生性酿酒酵母菌及其灭活菌均能促进绵羊瘤胃外植体内SBD-1的表达,且活菌浓度为107 CFU· mL-1、灭活菌浓度为108 CFU·mL-1分别诱导16 h时,绵羊瘤胃外植体内的SBD-1的表达量分别达到最大,并且益生性酿酒酵母菌的诱导效果高于其灭活菌.
本发明属于酿酒技术领域，具体涉及一种酱香型白酒续糟发酵埋藏方法。该方法包括以下步骤：新酒组合盘勾；酒库自然老熟；二次组合、勾兑、调味；按比例配糟，并进行堆积发酵，用于埋藏窖酒；将已经勾调好的成品白酒转运至窖池内的老坛里，上盖后用牛皮纸、防水布捆扎密封，用已经堆积发酵好的发酵酒糟填埋老坛至颈部位置；然后用茅台镇独有的紫红泥以完全密封的方式封窖封坛，埋藏时间为2年；烤取窖内发酵酒糟中的原酒作为调味酒，根据不同比例加入窖藏老酒中，从而调制出成品酒。克服现有白酒贮藏方法的老熟陈化效果质量差异大、贮存时间长、资金周转慢的缺陷，同时增加酒体呈香、呈味、药用成分，提高白酒品质和保健价值。
大曲是白酒中活性成分的重要来源.采用正相硅胶、反相硅胶、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20等色谱分离材料和柱层析分离技术,联合核磁共振(NMR)、质谱(MS)等波谱技术分离鉴定了6个化合物,分别为5-正十九烷基雷锁辛(1)、5-正二十一烷基雷锁辛(2)和5-正二十三烷基雷锁辛(3)、(1E,22Z)-1,22-diferuloyloxydocosane (4)、(1E,24Z)-1,24-diferuloyloxyteracosane(5)和(1E,26Z)-1,26-diferuloyloxyhexacosane(6),以上6种化合物均为首次从酿酒大曲中发现的酚类化合物,且均具有显著的抗氧化活性.