笃斯越桔中酿酒酵母菌的筛选、鉴定及特性研究

从口感好、自然发酵的笃斯越桔果汁中分离出140株酵母菌.经过对酵母菌产气、产酒精情况的测定以及发酵酿酒后感官评定,筛选出4株酵母菌,分别编号为C13、C18、D07和D15.对这4株酵母菌进行形态学和生理学特征鉴定以及26SrDNA D1/D2区序列分析,最终鉴定出4株酵母菌为同一种菌,即酵母属(Saccharomyces )中的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae).结合商业葡萄酒活性干酵母进行比较分析,选择优良菌株D15作为实验菌株,测定其生物特性,结果表明D15具有较好的发酵特性、耐受特性和快速生长特性.D15在20°Bx、pH 3.5笃斯越桔果汁中24℃发酵9d,残糖量为2.8 g/L,酒精度(V/V)为12.5%,可以作为笃斯越桔酒酿造的优选菌株.
基于酿酒酵母中已经报道的3个典型GPCR序列,利用Blastp以及关键词对炭疽菌蛋白质数据库进行比对、搜索,通过SMART保守结构域及遗传关系分析.结果表明:发现该菌存在4个典型的GPCR;4个GPCR在蛋白质二级结构上均含有典型的7跨膜结构域以及较高比例的α螺旋结构,均不含有明显的信号肽序列;在定位方面,4个GPCR均定位在质膜上;该菌中的GPCR与C.higginsianum、C.fioriniae等炭疽菌属中的病菌具有较高的同源序列以及较近的亲缘关系.
在同种工艺条件下,以实验室保藏的5株酿酒酵母(A、B、C、D和E)及欧洲进口的5株活性干酵母(S04、S23、S33、S189和安琪)为出发菌,测定了发酵过程中发酵速度、α-氨基氮(α-AN)、主酵结束后风味物质、有机酸和可发酵性糖等指标,并系统地比较了不同酵母的发酵性能和风味.结果显示,菌株S23发酵速度较快,发酵液中高级醇、乙酸和可发酵性糖的含量较低,分别为56.12 mg/L、62.86 mg/L和0.62 mg/L,柠檬酸的含量较高为194.46 mg/L.研究表明菌株S23的综合性能最佳,具有应用于苹果啤酒生产的潜能.
利用酿酒酵母生产人源化糖蛋白,需对其糖基化途径进行基因工程改造.酿酒酵母糖基化相关基因ALG3、OCH1、MNN1的敲除导致胞内糖蛋白低的N-聚糖位点占有率和菌株缓慢的生长速度.为了提高糖基化缺陷型菌株的N-聚糖位点占有率,酿酒酵母的ALG6基因被过量表达.结果表明,ALG6的过量表达不仅能够提高菌株N-聚糖位点占有率,还能回补其生长速度,提高外源蛋白人类溶菌酶的分泌效果.
通过对引进106个国内外酿酒葡萄品种生长特性的观察及单品种酿酒试验,从中筛选出适宜干旱炎热生态条件的优质酿制葡萄品种6个.酿制优良干白葡萄酒品种为:保加利亚红玫瑰,科维丁卡,和田红.酿制优良干红葡萄酒品种为卡玛特,黑多内,黑麦道克.
巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质.与酿酒酵母Saccharomyces ceresiviae相比,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛.有关研究主要涉及以下几个方面:宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等.