酿酒酵母高效自主复制区的筛选与鉴定

在酵母表达过程中,传统的表达载体存在着拷贝数低以及稳定性差的缺点.因此,找到一个可用于构建复制整合型载体的高效酵母自动复制区(Autonomously Replicating Sequence,ARS)是解决问题的关键.研究中,从酿酒酵母基因组中扩增得到4种不同的ARS(ARS304、ARS315、ARS735、ARS1512),然后连接到整合载体pNTS2K中,得到4种复制整合型载体(pNTS2K-ARS304、pNTS2K-ARS315、pNTS2K-ARS735、pNTS2 K-ARS1512).经电转化后,4种转化子(36a(pNTS2 K-ARS304)、36a(pNTS2K-ARS315)、36a(pNTS2K-ARS735)、36a(pNTS2K-ARS1512))都能在含有300 μg/mL G418的YPD平板上生长.然而,只有转化子36a(pNTS2K-ARS315)能在含有500 μg/mL G418的YPD液体培养基里较快生长.经过G418耐受性检测后,36a(pNTS2K-ARS315)仍能在含有1 mg/mL G418的YPD培养基中很好地生长.此外,通过质粒pNTS2 K-A RS315表达荧光蛋白,其表达效果高于普通商业质粒.实验结果证明,4种复制区都能在酿酒酵母中独立自主复制,其中ARS315复制能力最强.因此,ARS315可用于构建高拷贝且稳定的重组质粒,为构建高表达且稳定的工程酵母菌株奠定了基础.
白酒的香气物质决定了白酒产品的差异.为了实现不同白酒产品的区分鉴别,提出了基于气相色谱分析技术结合模式识别实现白酒区分的方法.采集了7种产品共70个白酒样本的气相色谱数据,定性定量分析了己酸乙酯,乳酸乙酯等10种基本香气物质的含量,并对测定的物质进行主成分分析,验证区分效果,最后利用线性判别法建立判别函数,对不同白酒进行区分.结果表明,2种分析方法均可用于区分不同白酒,主成分分析结果显示,前3个主成分累计贡献率为86.527%,能有效描述香气物质和产品之间的复杂关系;线性判别分析对所有样本均得到准确的判别,正确率为100%,对预测样本的正确判别率达93.9%,建立的判别函数能准确区分不同白酒.研究表明,利用气相色谱技术结合模式识别的方法可用于不同白酒的区分鉴别.
HAL1基因是酵母中重要的耐盐基因.以酿酒酵母 AS2.375菌株的DNA为模板,根据已发表的序列设计引物,经PCR扩增得到约900bp的HAL1基因片段,连接到pMD18-T载体上,转化大肠杆菌JM109,筛选重组质粒进行酶切分析和序列测定,结果显示已克隆到完整的可读框,该基因的序列与已知序列同源性达99%.将HAL1基因从T-载体上切下连接到AM194载体上构建了HAL1基因的植物表达载体,用于烟草的转化获得了耐盐性提高的转化植株.
以海藻糖、葡萄糖、半乳糖3种标准品和啤酒酵母细胞为试验原料,利用高效液相色谱分析方法,分别构建了海藻糖、葡萄糖、半乳糖3种糖HPLC检测方法.研究表明:海藻糖、葡萄糖、半乳糖的保留时间依次为7.6、9.5、10.4min,标准曲线的回归方程依次为:y 海藻糖=160421 X+202.29(R2=0.999 7),y葡萄糖=166 165X(R2=0.998 4),Y单乳糖=172 092X+1062.2(R2=0.999);利用该方法分析啤酒酵母细胞中海藻糖含量较高,同时发现啤酒酵母细胞破壁样品中存在其他2种未知糖类.
以长石、白云石、龙岩高岭土、方解石和石英等为原料，在1260℃制备中高温冰裂纹釉。利用单因素试验通过改变配方组成和工艺条件等影响因素，研究其对冰裂纹釉面的影响。实验结果表明：当配方组成中硅灰石含量为3％～4％，高岭土／石英的质量比为6∶14，浸釉时间为12 s 时，可得到釉面光滑且裂纹呈大开片的冰裂纹效果。其成因是由于釉坯间的热膨胀系数不同，导致釉面存在较大应力，使较差的坯釉中间层有效地传递了胎釉间的应力导致釉层内开裂，裂纹在扩展过程中遇见釉层中气泡发生方向偏折，而形成了类似晶花态的“冰裂纹”形貌。
采用PCR-DGGE技术,比较新疆传统发酵酸驼乳中微生物种群结构及图谱相似性.结果表明:不同来源的酸驼乳中微生物组分存在差异,9份样品间细菌种群结构的相似性为78%～84%,5份样品间酵母菌种群结构的相似性为80%～92%.对酸驼乳细菌和酵母菌DGGE图谱上主要条带的DNA进行测序和序列分析.结果表明:酸驼乳中细菌组成包括巨型球菌(Macrococcus caseolyticus)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、希腊魏氏菌(Weissella hellenica)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)、肠球菌(Enterococcus durans)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)及乳酸明串珠菌(Leuconostoc lactis)等;酵母菌主要包括巨大克洛维酵母(Kluyveromyces marxianus)、单孢酿酒酵母(Kazachstania unispora)、嗜酒假丝酵母(Candida ethanolica)及一种地霉菌(Geotrichum sp.).