高通量测序技术在酿酒微生物多样性研究中的应用

高通量测序技术是分析研究酿酒微生物多样性的重要手段,与其他方法相比,具有测序方法简单、通量高、速度快和准确度较高等特点.本文在阐述高通量测序技术特点和测序平台的基础上,着重介绍其在酿酒微生物多样性研究领域中常用的数据分析方法和应用现状,旨在为酿酒微生物多样性研究者提供较为系统、全面的关于高通量测序技术的使用策略.
建立了测定啤酒和鲱鱼精DNA中的碱基和核苷的阳离子交换色谱法.采用强阳离子交换柱,以水(A)和稀H2SO4(B,pH 2)为流动相,梯度洗脱:0～15 min,0～50% B.6种核苷和碱基(次黄嘌呤、鸟苷、胞苷、胞嘧啶、鸟嘌呤和腺嘌呤)在18 min 内实现基线分离,UV检测波长为254 nm.实验表明,6种核苷和碱基的工作曲线的线性范围为0.1～100 mg/L;检出限为0.009～0.068 mg/L (S/N＝3),峰面积和保留时间的相对标准偏差(RSD)分别为1.3%～2.2% 和1.6%～3.1%.将本方法用于啤酒和鲱鱼精DNA中的碱基和核苷的分析,平均回收率为89.5%～102.9%.
该实验探究乳酸菌与酵母菌结合发酵枸杞饮料时,不同发酵方式下枸杞饮料的主要成分、抗氧化活性及两者相关性.以枸杞汁为底物,在30℃接种2.5％乳酸菌(嗜热乳杆菌:植物乳杆菌:鼠李乳糖杆菌质量比为1:2:1)和非酿酒酵母(绿茶培养的红茶菌中分离出的)制备发酵枸杞饮料.结果表明,与乳酸菌和酵母菌混合发酵相比,先乳酸菌发酵再酵母菌发酵枸杞饮料的还原糖含量(5.91 mg/L)下降更快,总酚(5.121 mg/L)和总黄酮(118.64 mg/L)含量较高,抗氧化活性更强,生成的挥发性风味物质包括6种醇类、7种烷烃类和8种酯类;其中总酚和总黄酮含量与DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、羟自由基清除率均呈现显著性正相关,与超氧自由基清除率呈现显著性负相关.发酵枸杞饮料有良好的抗氧能力,为不同发酵方式下枸杞饮料的探究奠定理论基础.
目的:筛选酒川芎饮片的最佳炮制工艺.方法:采用正交试验方法,选择黄酒种类、黄酒用量、炮制温度三个因素,以挥发油、氯仿浸出物、阿魏酸含量为指标进行正交试验.结果:酒川芎饮片最佳炮制工艺为:取川芎饮片1 kg,加古越龙山黄酒80 ml闷润,待酒被吸尽后,置炒制容器中,炒干(120℃),取出,放晾.结论:该法可为酒川芎饮片的规范化炮制提供简便、可行的方法.
目的：探究黑木耳黑色素对缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）小鼠生理及肠道菌群的影响。方法：选取45 只24 日龄的雄性昆明小鼠随机分为2 组：对照组（15 只）始终饲喂正常饲料，饮用去离子水；模型组（30 只）饲喂低铁饲料、饮用超纯水2 周进行造模，随后将模型组随机平均分为2 组（IDA组和IDA-M组），继续饲喂低铁饲料，饮用超纯水3 周；IDA-M组在造模2 周后灌胃200 mg/（kg mb·d）黑木耳黑色素，灌胃体积0.2 mL，干预3 周，干预期间IDA组灌胃等体积超纯水。每周测定各组小鼠体质量，实验结束时测定各组小鼠血常规并采用高通量测序分析小鼠粪便菌群组成。结果：造模2 周后，与对照组相比，模型组小鼠体质量显著降低（P＜0.05）；黑木耳黑色素干预3 周后，与IDA组相比，IDA-M组小鼠体质量显著增加（P＜0.05），白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白质量浓度、红细胞比容、平均红细胞体积等贫血指标均恢复至正常水平，表明黑木耳黑色素具有改善IDA的效果；Illumina Miseq高通量测序分析结果表明，IDA会导致小鼠肠道菌群紊乱，极显著改变肠道菌群多样性指数（Shannon、Chao1、Ace、Simpson指数）（P＜0.01）；灌胃黑色素后，与IDA组相比，IDA-M组小鼠肠道菌群多样性指数和整体结构得到显著改善（P＜0.01），在门水平上，拟杆菌门（Bacteroidetes）和变形菌门（Proteobacteria）相对丰度明显降低，厚壁菌门（Firmicutes）和疣微菌门（Verrucomicrobia）相对丰度明显升高并均恢复至正常水平，在属水平上，黑木耳黑色素干预可以增加主要优势菌属相对丰度，有益菌另枝菌属（Alistipes）和阿克曼氏菌属（Akkermansia）相对丰度高度显著增加（P＜0.001），条件致病菌副拟杆菌属（Parabacteroides）相对丰度极显著降低（P＜0.01）。结论：黑木耳黑色素可以通过改善IDA小鼠的体质量和血常规指标来缓解IDA症状，并可以增加IDA小鼠肠道菌群多样性和优势菌群相对丰度，使有益菌相对丰度增加、致病菌相对丰度降低。
本发明公开了一种兼香型养生白酒，采用如下重量份原料：以原浆白酒4?7公斤、黄酒1?2公斤、米酒1?2公斤、糯米酒0.5?1公斤作为基酒，于7?12公斤基酒中加入葛根20?70g、荷叶15?35g、红豆杉70?300g、魔芋70?200g。本发明散热解毒、抑菌消炎等养生保健作用。