ADK基因在酿酒酵母中的表达和ATP合成研究

采用基因工程技术,将催化ATP合成的酶-ADK的基因克隆进表达载体YEpN181P2获得重组质粒YEpN-ADK,转化酿酒酵母GRF18后,ADK基因获得表达.用重组菌株GRF18(YEpN-ADK)发酵合成ATP其产率比对照菌株GRF18提高75%.
本试验利用法国著名葡萄分类学家皮埃尔·嘎勒的葡萄叶片表现型分类方法,对烟台葡萄产区主载酿酒品种的叶形结构参数进行测量分析和叶片的标准化描述.结果表明,12个品种的9个叶形参数方差分析结果均达到差异显著水平,可作为鉴别葡萄品种的叶片参数指标,但以SS、SI、δ、ε和S等5个参数鉴别效果最为明显.利用该方法建立葡萄品种资源数据库,既有利于品种资源信息收集,实现品种标准化描述,也有利于对生产中容易混淆的品种进行直观准确鉴别.
将优化后的枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(serine alkaline protease,SAP)基因克隆到酿酒酵母表达载体pYES2上,在酿酒酵母Whu2d中进行表达.发酵酿酒酵母工程菌,对重组碱性蛋白酶酶学性质和降解豆粕中蛋白类抗营养因子效果进行研究.结果显示:工程菌发酵液中碱性蛋白酶酶活比出发菌株高55.2％.其最适反应温度和pH分别为45℃和8.0,在pH值为7.0 ～10.5时具有较好的稳定性,相对酶活可以保持在80％以上.与出发菌株相比,工程菌发酵后豆粕培养基中酸溶蛋白含量提高42.1％,粗蛋白和β-伴大豆球蛋白含量无显著差异,大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子的含量分别降低41.9％和57.4％.以上结果表明:该碱性蛋白酶酿酒酵母工程菌可以用于饲料、食品等富含蛋白原料的加工.
为了利用转基因技术在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中生产二十二碳六烯酸(DHA,22∶6A4,7,10,13,16,19n-3),构建了同时含C20-△5脂肪酸碳链延长酶(TFD5)和C22-△4脂肪酸碳链脱饱和酶(FAD4)基因的共表达质粒pYTFD5-FAD4.该质粒是通过基因重组的方法,使脂肪酸碳链延长酶与脱饱和酶基因置于各自启动子和终止子下获得的.共表达质粒pYTFD5-FAD4转化酿酒酵母所得到基因工程菌,在添加终质量分数为2%的半乳糖,终体积分数为1%的NP-40和0.3 mmol/L的底物二十碳五烯酸(EPA,20∶5△5,8,11,14,17n-3)下进行诱导,可直接转化二十碳五烯酸(EPA,20 ∶ 5△5,8,11,14,17n-3)生成二十二碳五烯酸(DPA,22 ∶ 5△4,7,10,13,16n-3)和二十二碳六烯酸(DHA,22 ∶ 6△4,7,10,13,16,19n-3).
本发明提供一种封闭式盒装白酒自动售货柜，是由柜体、柜门和智能控制器组成，柜体中分层设置有储货皮带机和售货皮带机，盒装白酒排列在储货皮带机和售货皮带机上，出货皮带机的传送方向与售货向皮带机的侧面相对，售货皮带机的传送方向与设置在售货皮带机端部的售货机构相接，售货机构是由售货转盘和驱动电机组成，驱动电机设置在售货转盘的底部通过齿轮啮合传动，售货转盘的上部设置有半圆形出货筒，半圆形出货筒的开口与设置在柜门上的取货口相对应，智能控制器设置在取货口的侧面。该封闭式盒装白酒自动售货柜和现有技术相比，具有设计合理、安全可靠、杜绝售假、易于维护等特点，因而，具有很好的推广使用价值。
本研究以7 种西藏特有的青稞品种及相应发酵青稞酒为对象，基于理化性质、营养、风味和感官等指标，采用典范对应分析（canonical correspondence analysis，CCA）和主成分分析（principal component analysis，PCA）等探究青稞品种与其发酵酒品质的关系。研究表明，与青稞原粮相比，青稞酒体氨基酸中必需氨基酸占比增加，可能是酿造过程中非必需氨基酸转化形成了必需氨基酸。CCA结果显示不同品种青稞原粮在总氨基酸、γ-氨基丁酸、β-葡聚糖和总多酚含量等方面具有一定相似性，但其营养结构的差异经微生物生物化学转化得以放大，为筛选青稞酒的优质品种提供了可能。通过青稞原粮及相应青稞酒中的蛋白质、氨基酸、γ-氨基丁酸和总多酚水平等营养指标分析初步优选出‘藏青2000’为酿酒青稞品种，其次是‘隆子黑’‘芶芝黑’‘藏青25’。结合青稞酒营养、风味和感官等多维度指标，最终确定‘藏青2000’为最佳酿酒青稞品种，其次为各具特色风味的‘芶芝黑’‘隆子黑’‘藏青25’。本研究可为我国青稞酒领域的发展提供参考。