糖化酵母糖化酶基因在酿酒酵母中的克隆与表达

[目的]使酿酒酵母高效表达糖化酵母糖化酶基因.[方法]利用PCR技术从糖化酵母中扩增出大小为2700 bp左右的带有启动子的糖化酶基因STA1.通过限制性内切酶BspDI与Acc65I双酶切,将目的基因STA1连接到穿梭质粒pRS416中构建重组质粒pRS416-sta1,转化酿酒酵母通过筛选.[结果]糖化酶活性最高为120 U/ml,酶的最适温度为60℃,最适pH为5.0,在酶催化反应2h后,酶剩余活力能达到约90％.[结论]通过基因工程手段得到高效表达糖化酶基因的酿酒酵母工程菌株.
本文根据近二十年来国内外在冰核活性蛋白方面研究的报道与成果,以真核生物细胞的G PI(Glycosylphatidylinosito1,简称GPI)锚体系作为参考,主要针对冰核蛋白糖脂复合物的组成成分,在论证建立冰核蛋白糖脂复合物的组装过程的机制及表现出生物冰核活性所需的结构特征等方面进行了较为系统的综述,这对冰核蛋白的深入研究具有重要的意义.
生活方式与骨质疏松症的发生密切相关.吸烟、酗酒都是骨质疏松症发病的高风险因素.本文分别从生物模型、动物实验、细胞实验、分子机制等方面综述吸烟性骨质疏松症、酒精性骨质疏松症的最新研究进展.
从长枝木霉3.1029基因组中克隆了内切葡聚糖酶EG1基因,该基因全长1566 bp,由3个外显子2个内含子组成,编码461个氨基酸,编码蛋白的N端为22aa组成的信号肽.采用重叠PCR法获得无内含子的内切葡聚糖酶基因eg1,构建成pYE-Leg1重组质粒;同时将其成熟肽编码序列插入酿酒酵母分泌型表达载体pYEα中,构建成pYEα-Leg1重组质粒;分别转化酿酒酵母.重组转化子经β-半乳糖诱导,检测表达产物的酶活,结果表明,pYE-Leg1转化子无明显胞外酶活;而pYEα-Leg1转化子在刚果红平板上可产生明显的水解圈,酶活检测显示pYEα载体可有效地将该基因在酿酒酵母中表达并分泌到胞外,发酵液中的酶活在培养96 h达到最高1.16 U/mL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为5.6.以上研究将为利用酿酒酵母生产胞外纤维素酶提供依据.
通过控制水力条件,使拦冰索能够有效拦截浮冰、使得浮冰能够在拦冰索前停滞堆积而形成冰盖,是保证南水北调中线工程冰盖下安全输水的关键.本文基于中线干渠冰期原型观测数据,分析了浮冰下潜的临界水力条件,表明传统的第二临界Fr(0.08～0.09)只适用于判别冰盖前缘的浮冰运动状态,对于判别拦冰索前浮冰运动状态、分析拦冰索的拦冰能力具有局限性,并论证了采用Ashton孔口排冰公式来判断拦冰索前的流冰运动状态的合理性.研究表明,同一水力条件下,拦冰索的水下淹没深度越大,其拦冰性能越好,拦冰索前冰凌下潜的临界Fr越大;并在此基础上确定了中线工程各渠池拦冰索的最小淹没深度.研究成果可为中线工程冰期输水方案制定和拦冰索技术改造提供依据.
本研究运用PCR扩增技术和18S rDNA序列同源性分析方法,探讨浓香型白酒糟醅中酵母和丝状真菌的区系构成及演变规律.结果表明,糟醅样品中以酵母属(Saccharomyces),伊萨酵母属(Issatchenkia),假丝酵母属(Candida),汉逊酵母属(Hansenula)和曲霉属(Aspergillus)等5属的真菌为主要优势菌;上层槽醅比下层糟醅的... 查看全部>>