酿酒酵母YBR019C 基因缺失突变的分析

【目的】研究目的基因YBR 019C 缺失对酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）菌株糖代谢和乙醇发酵的影响。【方法】以酿酒酵母野生菌 NF1002为出发菌株，选择2号染色体上的基因 YBR 019C 为目的基因，以质粒pUG6和 pUG66为模板进行 PCR，构建带有 Cre/loxP 系统的酿酒酵母YBR 019C 基因敲除组件，并转化酿酒酵母 NF1002，利用筛选标记 Kan r和 Ble r与YBR 019C 基因进行同源重组，筛选YBR 019C 双倍体缺陷型菌株。利用蔗糖和甘蔗糖蜜为碳源，对突变菌进行发酵特性的研究。【结果】成功获得YBR 019C 双倍体缺陷型菌株 NF-ybr。碳源同化实验表明，突变株和野生菌均能利用葡萄糖和蔗糖，不能利用乳糖和木糖；但相比野生菌，突变株利用棉子糖和麦芽糖的能力有所下降，而且完全不能利用半乳糖。蔗糖发酵实验表明：突变株 NF-ybr 与野生菌株相比，在发酵终点乙醇浓度提高10．7％，发酵周期有所延长。按目前甘蔗糖蜜乙醇生产的发酵工艺，突变株在30℃发酵72h 的醪液乙醇含量为12．52％，低于野生菌的13．89％。【结论】YBR 019C 基因的缺失影响了菌株对糖份的利用，导致乙醇发酵能力不及野生菌。本研究为菌株高效快捷的基因改造提供了参考。
蛋白酶A(PrA)是啤酒酵母体内一种重要的天冬氨酸蛋白酶,由PEP4基因编码.它能够催化细胞内蛋白质水解,参与液泡中多种酶的加工和成熟过程.本文考察了蛋白酶A对酿酒酵母的抗辐射性影响.以正常单倍体酿酒酵母菌株和敲除PEP4基因的突变菌株为研究对象,比较两者抗辐射的特性.试验结果表明:蛋PEP4基因的敲除对啤酒酵母的抗氧化酶,即超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)有显著影响.蛋白酶A的缺失和辐射导致突变株细胞内海藻糖的积累量大幅增加.
MAPK(促分裂原活化蛋白激酶,Mitogen-Activated Protein Kinase)信号转导途径在植物病原真菌的生长发育、有性生殖和致病性调节等方面占有重要作用,是一种普遍存在的细胞外信号转导途径.在真核生物MAPK蛋白的同源性和2种炭疽菌(禾谷炭疽、希金斯炭疽菌)全基因组数据库的基础上,结合Blastp、蛋白质结构域分析和聚类分析3种方法,从禾谷炭疽菌和希金斯炭疽菌基因组数据库中找出18个与酿酒酵母菌同源的3类MAPK级联信号途径基因,并绘制出这2种炭疽菌MAPK级联信号途径简图,为深入研究炭疽菌MAPK级联信号途径基因生物学功能及其相关信号网络特点奠定基础.
为了在发酵过程中减少双乙酰的产生,防止成品啤酒中双乙酰反弹,利用激光诱变育种技术,选育双乙酰生成量低的啤酒酵母,可解决双乙酰问题.用He-Ne激光作为诱变光源,照射啤酒酵母细胞,在合适的时间和剂量下,得到一株优良菌株.用该菌株酿造的啤酒,其双乙酰值为0.1253mg/L,比原菌株下降了30%.
试验以单二大麦、苏啤3号两个大麦品种为材料,研究氮肥用量及运筹对啤酒大麦产量、千粒重和籽粒蛋白质含量的影响.结果表明:(1)随着氮肥施入量的增多,大麦籽粒蛋白质含量不断增加,同一施氮水平下,氮肥后移会导致籽粒蛋白质含量提高.(2)在250kg/hm2氮水平下,基追比为7:3时,两个品种产量均达到最高,分别为6833.68kg/hm2和7055.91kg/hm2.(3)施氮量的多少对大麦千粒重有显著影响,同一施氮水平下不同品种籽粒千粒重的差异主要是由品种本身的遗传差异决定的,受氮运筹的影响较小.(4)综合各方面表现,苏啤3号要远远好于单二大麦,大面积生产上应逐步以苏啤3号来替代单二大麦,以提高大麦的产量和品质,从而达到高产高效的目的.
[目的]研究加工苹果品种的酚类物质组成及其与果实褐变的关系,为选择加工品种和加工工艺提供依据.[方法]利用Folin-C法和高效液相色谱法等测定分析了10个苹果加工品种(4个酿酒品种、6个制汁品种)的果实酚类物质组成、果实褐变度及多酚氧化酶活性.[结果]果实中酚类物质的含量和比例因品种类型而异,苦涩酿酒苹果总酚含量高于甜或酸苹果.原花青素、绿原酸、表儿茶素及儿茶素是苹果果肉中含量较高的酚类物质,苹果特征酚类物质根皮苷在苦绯甘品种中大量存在.果实的褐变度与总酚、原花青素、儿茶素和根皮苷相关性较高,绿原酸与果实的褐变度相关性较低.[结论]酚类物质含量与苹果加工品种类型有关,酿酒品种的总酚含量高于制汁品种.果实中黄烷-3-醇含量对褐变度影响较大.