Survivin启动子介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的抗肿瘤研究

目的 探讨Survivin启动子介导的CD/5-FC自杀系统的抗肿瘤效果.方法 利用Survivin启动子替换pEGFP-N1载体上的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建重组表达载体pSurP-EGFP,通过报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达确定Survivin启动子的特异性;将酿酒酵母的胞嘧啶脱氨酶(CD)基因克隆在pSurP-EGFP中,构建成重组载体pSurP-CD,转染肿瘤细胞后利用毛细管电泳仪检测前药5-氟胞嘧啶(5-FC)的转化效率,同时分析肿瘤细胞的凋亡.结果 GFP的表达表明Survivin启动子具有较好的肿瘤靶向性;毛细管电泳检测表明CD能够有效地将5-FC转化为5-FU,显微镜观察和流式分析表明了Survivin启动子介导的CD的抗肿瘤效果.结论 Survivin启动子能有效地介导CD自杀基因的表达,具有较好的靶向性抗肿瘤效果.
通过酵母菌的分离、显微镜观察和WL培养基的筛选,初筛出酵母菌10株.采用猕猴桃果汁发酵法、CO2损失质量比较法、以及生理生化的鉴定,从中复筛出一株发酵能力好、产果香酒香浓郁的菌株Y-41.查阅《酵母菌的特征与鉴定手册》,初步鉴定该菌株为毕赤酵母属,再通过分子生物学鉴定,确定该菌株为库德里阿兹威氏毕赤酵母(Pichia kudriavzevii).对Y-41菌种进行了耐受性检测,结果表明Y-41对葡萄糖、酒精度、pH值具有较高耐受性,可作为富硒猕猴桃果酒发酵专用菌种.
本研究对分泌表达pEGF的重组酿酒酵母在断奶仔猪日粮中的应用效果进行验证.72头21～24日龄的断奶仔猪((6.10±0.15)kg),随机分为3组(每组4个重复,每个重复6头):对照组(基础日粮+228mL·kg-1空白培养液)、空载体组(基础日粮+228 mL·kg-1空载体)及重组酵母组(基础日粮+228 mL·kg-1 INVSc1 (pYES2-Mfα-spEGF)).21 d后,每组每栏选取1头仔猪屠宰,分别测定其小肠组织形态、小肠黏膜中IgA、IgG及IgM水平,碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)的酶活力及mRNA转录水平,小肠黏膜中表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGF-R)的mRNA转录水平.结果表明,与对照组及空载体组相比,重组酵母组INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)能够显著提高断奶仔猪小肠各段(十二指肠、空肠及回肠)黏膜中EGF-R及消化酶(ALP、CK及LDH)的mRNA转录水平(P＜0.05),极显著提高CK和LDH的酶活力(P＜0.01),显著促进其空肠及回肠黏膜中IgA、IgG及IgM水平(P＜0.05),提高其平均日增重(ADG)及降低F/G(P＜0.05).综上,本研究获得的重组酿酒酵母INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)表达的EGF蛋白具有较高的生物学活性,能明显促进断奶仔猪小肠黏膜发育及其免疫功能,具有向养猪生产进一步转化的开发价值.
冰蓄冷空凋技术起源于20世纪30年代美国,并在20世纪70、80年代世界能源危机时得到大力发展,目前在欧美日等发达国家使用较多.以当地医院为例对冰蓄冷技术的运用及优点进行了分析,运行显示,该技术具有良好的社会经济效益.
利用酿酒酵母YT0801的总DNA为模板,采用PCR技术克隆出转氨酶Ⅰ基因的DNA序列,利用生物信息学工具对其核酸序列和蛋白序列进行分析.测序结果表明DNA序列含有一个1503bp的开放阅读框,编码500个氨基酸,推测等电点为5.81,相对分子质量为56.2ku.同源性比对结果显示,该基因及推测的氨基酸序列与已报道的ARO8基因(GenBank Accession No:NM 001181067.1)的同源性均为100％.此外,对其理化性质、信号肽、疏水性、亲水性、二级结构和三级结构进行了分析.该基因的成功克隆,为其功能研究和生物合成2-苯乙醇提供了分子基础.
介绍了输电线路交流冲击短路融冰方法的原理,给出了交流冲击短路融冰方案编制的流程,并对融冰方案编制时融冰路径的选择方法、方案计算和方案校核及相关继电保护的配合等问题进行了详细分析,最后针对桂林电网的一条110 kV线路进行了交流冲击短路融冰方案设计,为其他地区制定交流冲击短路融冰方案提供借鉴.