菠菜乙醇酸氧化酶的酶学特性及同工酶电泳分析

为了解析菠菜乙醇酸氧化酶(SpGLO)的酶学特性及同工酶谱.首先提取菠菜的RNA并反转录成cDNA,通过NCBI数据库中提供的菠菜GLO基因mRNA序列信息,设计特异性引物,扩增目标序列并连接到pMD19-T载体上进行测序鉴定;随后再次设计引物并在上游引物加入His标签,克隆SpGLO基因构建到pYES2载体上,将该载体转入酿酒酵母中进行表达并通过His-tag亲和柱纯化,然后在不同诱导时间点取样测定SpGLO酶活.结果显示,转化后的酿酒酵母菌株在诱导发酵20 h后能得到最高的GLO活性.以乙醇酸为底物测定SpGLO在不同pH、不同温度条件下的催化活性,其最适pH值为8.0,最适温度为39℃.然后分别以乙醇酸、乙醛酸、甘油酸为反应底物,系统分析了SpGLO的酶学特性,数据显示,SpGLO对乙醇酸的亲和力最高,其Km为0.41 mmol/L,Vm为45.92μmol/(min·mg).以乙醇酸、乙醛酸为底物,使用草酸抑制其催化活性,其Ki分别为4.61,2.09 mmol/L,表明以乙醛酸为底物时SpGLO的催化活性更易被草酸抑制.同时将纯化后的SpGLO通过Caps-氨水电泳体系进行同工酶电泳,经过染色后出现2条同工酶带,表明菠菜叶片中可能存在2种GLO同工酶.为将来深入研究植物GLO同工酶之间的生化特性差异并分析其不同生理功能奠定良好的基础.
伴随经济的发展和科技水平的不断提升,公众的旅游观念也在发生转变,一些常规的旅游方式和设施已远远不能满足公众的新需求,"智慧旅游"逐渐从理念向实践转化.近几年,酒庄旅游已成为时尚,初步探索酒庄智慧旅游建设,希望为建设精品酒庄及酒庄的产业升级,提供一定的参考和借鉴.
使用序批式反应器,以啤酒厂的普通活性污泥为接种污泥,成功培养出成熟稳定的好氧颗粒污泥,并应用于处理城市生活污水的试验研究.考察了好氧颗粒污泥在常温下对COD以及NH+4-N的去除效果,平均去除率分别达到80%.82%.试验过程中颗粒污泥质量浓度在2 700～3 600 mg·L-1范围内变化.高于普通活性污泥系统.且沉降性能良好.污泥容积指数在30-50 mL·g-1范围内变化,颗粒污泥的平均粒径稳定在O.5-1.2 mm.
糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因.为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Snl203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因片段后,连接酵母表面展示载体pYD1,构建重组质粒pYDl-G.将pYDl-G转化酿酒酵母EBY 100细胞后,利用半乳糖诱导G蛋白的表达.利用细胞免疫荧光、Western Blotting及流式细胞仪检测酵母表面G蛋白的表达情况.细胞免疫荧光结果显示,转化了pYD l-G重组质粒的酵母细胞表面呈现出特异性荧光;Western Blotting结果显示,经半乳糖诱导后G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;流式细胞仪检测结果表明,随着半乳糖诱导时间的增加,G蛋白的表达量随之增加,并在诱导48 h时达到峰值.以上研究表明G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达,本研究为以酵母为活载体的新型口服疫苗的研制奠定了基础.
本发明公开了一种风味白酒及其制作方法，包括组分及重量比的葡萄汁12～13％、芒果汁5～8％、枸杞2～6％、芹菜杆5～7％、小米椒1～2％和白酒余量；一种风味白酒的，将枸杞、芹菜杆、小米椒捣碎后放入白酒中浸泡5～10min，然后加入葡萄汁和芒果汁混合而成。本发明具工艺简单、生产周期短，口味十足，具有广阔的市场前景。
以烟台地区霞多丽葡萄自然发酵醪为材料,筛选鉴定本土酿酒酵母并测定其发酵力和耐受性,选育优良酵母用于霞多丽干白和赤霞珠干红葡萄酒的酿造.用孟加拉红培养基筛选酵母菌,经WL显色鉴别培养基和5.8S ITS序列鉴定获得12株酿酒酵母.通过测定受试菌株发酵后残糖量、酒精度及耐受能力(酒精度、SO2、酸、高糖),选育4株酵母用于酿造霞多丽干白葡萄酒,测定发酵参数指标和主要挥发物含量,并结合感官评定确定酵母YXF2、YXF5和YXF10适宜酿造干白葡萄酒.菌株YXF5和YXF10酿造生产的干红葡萄酒香气特征明显,不同于商品酵母,具备酿造地域特色葡萄酒的潜力.