采用RT-PCR(reverse-transcription PCR assay)技术,从里氏木霉QM9414 mRNA中扩增出木聚糖酶基因XYN2,并与质粒pYX212相连,构建了组成型表达载体pYX212/XYN2.将此重组质粒转化入酿酒酵母菌株YPH499进行表达.分析了不同碳源、温度、摇瓶转速、初始pH对其产酶的影响.实验结果表明,最佳碳源是葡萄糖,最佳转速是260 r/min,最佳初始pH是6.0.优化重组菌的发酵条件后得到的最大酶活为0.55 IU/mL.
介绍了银南供电局冰蓄冷集中空调系统的主要设计参数,并根据实测数据总结了圆形盘管导热塑料蓄冰装置的制冰、融冰性能.
SNF4基因编码的Snf4p具有调节Snf1复合体的蛋白激酶活性功能,根据已知的SNF4基因序列设计引物扩增获得S.cerevisiae YS2的SNF4基因完整序列.序列分析表明,SNF4基因的开放阅读框为969bp,编码322个氨基酸残基.应用生物信息方法预测其理化性质、疏水性、信号肽、亚细胞定位、活性位点及其高级结构.结果表明:Snf4p为具有一定亲水性的非跨膜胞内稳定酸性蛋白,功能结构域为CBS_pair superfamily结构域,二级结构主要由a-螺旋组成,空间结构是由4个CBS结构域构成两个CBS对围绕形成的二聚体.Snf4p的第一个CBS对区域的β片层结构是Snf1p、Sip2p的β发夹结构结合作用区.
△12-脱饱和酶是亚油酸合成的关键酶,为提高△12-脱饱和酶的活性,本研究利用RT-PCR对Mucor sp.EIM-10的△12-脱饱和酶cDNA进行克隆,并导入pYES2.0质粒中,构建重组表达载体.运用醋酸锂转化法将重组质粒导入酿酒酵母,成功构建pYMD12酿酒酵母表达系统.为了进一步提高△12-脱饱和酶的表达水平,用GAP启动子替代pYES2.0质粒自带的启动子,成功构建pYGAPMD12重组菌.最终产物经GC-MS检测显示,pYGAPMD12重组菌转化C18∶1的转化率为69.172％,比pYMD12重组菌提高32.771％.本文为进一步提高△12-脱饱和酶的表达水平提供参考依据.
[目的]本文旨在研究高精料条件下,产朊假丝酵母(Candida utilis , I )、酿酒酵母A (Saccharomyces cerevisiae A,Ⅱ)、酿酒酵母B(Saccharomyces cerevisiae B,Ⅲ)、酿酒酵母 C(Saccharomyces cerevisiae C,IV)和热带假丝酵母(Candida tropicalis ,V )等 5 株酵母菌及其不同组合对牛瘤胃代谢影响,确定酵母菌之间的复合效应并筛选出优良的酵母菌组合.[方法]通过体外发酵技术,研究并分析 5 株酵母菌及其组合在添加量为 1×108 CFU·30 mL-1活菌数发酵液时,对牛瘤胃微生物体外发酵参数的影响.[结果]试验结果显示,不同酵母菌对瘤胃发酵的影响不同.在维持瘤胃内环境稳态方面,Ⅱ与 IV和 V存在复合效应,Ⅱ+IV、Ⅱ+V 组合较各单一菌株均可显著提高发酵液 pH值(P<0.05),降低发酵液总产气量(P<0.05);Ⅲ和IV、IV和V在降低氨氮(NH3-N)浓度方面存在复合效应.在调节瘤胃发酵模式方面,Ⅱ、Ⅲ和 V以及Ⅱ、IV和 V之间存在复合效应,乙酸比例及乙丙比均显著低于组内各单一及 2株组合菌,丙酸比例均显著高于组内各单一及 2 株组合菌(P<0.05 );Ⅱ、Ⅲ和 IV在戊酸形成方面存在复合效应,戊酸比例极显著高于组内各单一及 2 株组合菌(P<0.01).[结论]在高精料条件下,Ⅱ+IV、Ⅱ+V、Ⅲ+IV、IV+V、I+Ⅲ+IV、Ⅱ+Ⅲ+V、Ⅱ+IV+V菌株组合间存在复合效应.其中,Ⅱ+IV、Ⅱ+V组合在维持瘤胃 pH 值、稳定瘤胃内环境方面效果显著,是该条件下较为优良的酵母组合.
从四翅滨藜(Atriplex canescens) cDNA 文库中得到一个亮氨酸富集重复序列类受体蛋白激酶(Leucine-rich repeat receptor-like protein kinases,LRR-RLKs)的全长cDNA序列,命名为AcLRR(登录号:JN974247).为研究AcLRR的抗逆功能,将其构建到酵母表达载体pYES-DEST52,并转化到酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1 (pYES-AcLRR),对其进行盐、碱、干旱、高温、冷冻和活性氧等胁迫,分析在不同逆境胁迫下的表型特征.实验结果表明,INVSc1 (pYES-AcLRR)在各种胁迫下的存活率明显高于对照,表明AcLRR 基因具有抗NaCl,KCl,NaHCO3,Na2CO3、干旱、高温、冷冻和活性氧等胁迫的能力,特别对冷冻和活性氧表现出明显抗性.由此可推测该基因参与了四翅滨藜的抗逆调控过程.
微信客服
微信公众号
