分别以R.miehei 3.4960基因组和总RNA为模板,通过PCR和RT-PCR扩增得到脂肪酶全长基因和脂肪酶cDNA碱基序列,两碱基序列测序结果比对表明:脂肪酶DNA碱基序列由5个内含子和6个外显子组成,5个内含子大小分别为75、58、64、73、59bp,位于DNA序列(以起始密码子ATG的碱基A为1)的600～674位、929～986位、1076～1139位、1227～1299位、1382～1440位碱基处.脂肪酶RML mRNA碱基序列与已公布的R.miehei脂肪酶基因mRNA(EMBL Nucleotide Sequence Database Accession No.A02536)碱基序列有5个碱基的差异,其编码的氨基酸序列有1个发生了改变.利用酿酒酵母表达质粒pICAS1,实现了脂肪酶RML基因在酿酒酵母中的高效分泌表达,并对重组脂肪酶RML进行了相关酶学性质分析.酶学性质研究表明:重组酶的最适反应温度为45℃,最适pH值为8.6;该酶偏爱中链长的酯(C8～C12),对12个碳的酯具有最佳活性,对C16长链酯也有较高的活性,对短链酯的活性较弱;金属离子Cu<'2+>、Fe<'2+>对酶活性有显著抑制作用,Ca<'2+>和Mg<'2+>对酶活有部激活作用.
[目的]研究鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺和鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用.[方法]以鱼腥草为材料,浓度70％的乙醇为溶剂,设计L9(34)正交试验提取方法,优选出鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺条件；以多粘芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、裂殖酵母和酿酒酵母、黑曲霉为供试菌种,进行抑菌试验,研究鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用.[结果]优选出的提取方法为乙醇提取法,其较佳的提取条件为温度80℃,料液比1:20(g/ml),提取2次,每次提取2h;在此条件下,鱼腥草黄酮类物质的提取率达4.363％.鱼腥草叶乙醇提取液具有广谱抑菌特性,且对细菌的抑菌效果优于对真菌的抑菌效果；鱼腥草叶提取液对多粘芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、裂殖酵母、酿酒酵母和黑曲霉的最小抑制浓度分别为0.06、0.06、0.08、0.08、0.1、0.1和0.1 g/ml.[结论]研究出了鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺,并确定了其乙醇提取液的抑菌作用,为鱼腥草叶的进一步开发和利用提供了理论依据.
黔高7号是贵州省旱粮研究所选育的优质、高产酿酒用糯高粱品种,为实现该品种在我省广泛推广种植,笔者从适用范围、环境要求、种子处理、播种方法、田间管理、病虫害防治、收获等方面介绍了黔高7号的高效栽培技术.
分三个阶段即污泥菌种活化、生物膜培养、微生物驯化,阐述了在废水生物接触氧化处理中以牛奶加啤酒作营养液对生物膜进行培养与驯化的方法,并提出了实际应用中在生物膜的厚度、水温和pH、充氧量、营养物质等方面的有关注意事项.工程实践证明,运用该方法培养驯化生物膜效果良好.
近年来,宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄产业在持续发展的同时也存在诸多问题.本文通过对宁夏贺兰山东麓葡萄酒产业发展的背景、现状、资源优势进行分析,提出了贺兰山东麓酿酒葡萄产业发展对策,以期为该地区酿酒葡萄产业发展提供参考.
构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库,并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位.设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因,通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG,用DNase I将p97突变基因随机消化成长度100～250 bp的片段,回收产物经3’端加A处理后与用Xcm I酶切的酵母表达载体pCT-Xcm I连接,将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库.利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆,并进一步鉴定其最小抗原表位.结果:1)克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×10 6克隆,所有插入的片段随机分布,覆盖了全长的p97突变基因,文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆;2)随后对文库进行流式细胞分选,经鉴定选出184号一个抗原多肽.从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D(DEKTSSQKDPSTLRA)多肽为一个B细胞表位,该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应.P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定,184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位,本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义.
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