酵母耐盐相关基因HAL1在棉花中的功能表达

[目的]克隆酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)耐盐基因HAL1(halotolerance)并转化棉花,探究该基因在棉花中的功能,进一步探究酵母耐盐相关基因在高等植物中的具体功能.[方法]根据NCBI核酸数据库中酵母耐盐基因HAL1的mRNA全长序列信息,利用RT-PCR技术从酿酒酵母As2.375中克隆该基因.选择酶切位点Xba Ⅰ和Sma Ⅰ对表达载体pBI121::GFP进行双酶切,采用In-Fusion技术构建pBI121-ScHAL1::GFP融合表达载体.以自发荧光较弱的陆地棉品种Y-2067、ZA-23、GZ-2的花粉为材料,用基因枪轰击棉花花粉进行瞬时表达研究.采用基因枪活体转化技术将外源基因表达载体pBI121-HAL1::GFP转化棉花盐敏感材料中s9612,获得T0棉花转基因种子.用100 mmol·L-1 NaCl盐溶液对转基因T0种子进行耐盐性发芽试验,并进行分子检测,对鉴定出的转基因植株进行叶盘耐盐性分析.[结果]从酿酒酵母As2.375中克隆耐盐基因ScHAL1,基因全长885 bp,共编码294个氨基酸.对其序列进行分析,发现HAL1蛋白中丝氨酸所占比例最大,整个蛋白呈碱性且带正电,属于亲水性蛋白.根据蛋白二级结构预测结果,推测该蛋白的结构功能域可能主要由无规则卷曲和β-折叠片构成.棉花花粉瞬时表达结果表明,转化HAL1后,3种陆地棉花粉的绿色荧光现象都明显增强,说明该基因可以在这3种陆地棉的花粉中表达.用100 mmol·L-1 NaCl盐溶液对转基因棉花T0种子和受体材料中s9612自交种进行胁迫,发现转基因种子萌发能力明显强于受体材料,表明HAL1可以提高种子耐盐性.根据基因核苷酸序列设计2对引物对T0转基因棉花幼苗进行分子检测,将纯化后的PCR产物进行直接测序,测序结果证明转基因成功.对鉴定出的转基因植株进行叶盘耐盐性分析发现,在600mmol·L-1NaCl和400mmol·L-1NaCl盐胁迫下转基因植株叶盘叶绿素含量均高于对照植株,且在600 mmol·L-1 NaCl溶液胁迫后,转HAL1植株叶绿素含量反而高于400 mmol·L-1NaCl溶液处理后的叶盘.[结论]成功从酿酒酵母中克隆基因HAL1,酵母HAL1对提高棉花耐盐性具有重要作用.
采用保持荔枝果酒典型香气工艺、多菌种协调发酵、果糖促进发酵转化、超低温冷沉及三重过滤杀菌、绿色食品原料的控制技术与措施进行研发优质荔枝发酵酒产品.并着重介绍了优质荔枝发酵酒加工工艺流程中的创新点.
用结晶致孔法制备了内嵌SiO2颗粒的聚甲基丙烯酸羟乙酯基复合晶胶，经甲基丙烯酸二甲氨乙酯接枝修饰后，得到了阴离子交换复合晶胶介质，用于从啤酒酵母转化液中色谱分离三磷酸胞苷。色谱分离过程以0.01 mol·L-1 HCl为平衡液，以0.02 mol·L-1和0.1 mol·L-1的NaCl溶液（用平衡液配制）分步洗脱。通过高效液相色谱定量分析，所得三磷酸胞苷的纯度达97.2%，回收率82.5%。与其他分离方法相比，本法过程简单、分离迅速高效，在核苷酸药物的分离领域具有很好的应用前景。
对葡萄酒中SO2残留量的直接碘量法测定进行了半微量化改进研究.通过减小取样体积,减弱了有色葡萄酒中色素对滴定终点判断的影响;通过超声振荡加速结合态SO2的解离,缩短了分析时间;通过加碎冰控制反应温度改进为冰水浴控制,避免了稀释作用对反应的不良影响.经过方法学验证,该方法的精密度良好,相对标准偏差小于1％,准确度较高,回收率在95.0％～100.7％;方法的适用性强,可以测定不同类型葡萄酒中SO2的含量.使用改进后的方法对四大类别12个品牌的葡萄酒中SO2残留量进行了检测,结果均低于国家最高限量标准.
细菌是白酒酿造3大类微生物之一,其在白酒生产中有着重要的作用,如:芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌和梭菌等,它们能产生酯类、有机酸、吡嗪、萜烯等微量成分,从而影响白酒的风味与品质.基于细菌在白酒中的重要功能以及微生物分离培养技术和分析检测技术的进步,近年来相关研究越来越深入.该文综述了近年来白酒功能细菌的研究进展,介绍了酿酒各个环节中主要功能细菌及其在白酒中的作用,旨在为白酒功能细菌的研究提供参考.
在葡萄酒生产控制环节,葡萄原料采收期的确定是影响葡萄酒质量的重要因素之一.通过研究酿酒葡萄主栽品种梅尔诺在不同采收期果实及相应葡萄酒的基本理化成分,主要功能性成分——酚类物质及其抗氧化能力的变化,利用主成分分析法确定梅尔诺的最佳采收期.研究结果显示,葡萄中的总酚、总黄酮、总黄烷醇及总花色苷均在9月30日采收时含量最高,DPPH清除力以及铜离子还原力在9月30日采收时最强,铁氰化钾还原力以及羟自由基清除力在10月6日采收时最强；对于葡萄酒,总酚、总黄酮及总黄烷醇在10月6日含量最高,DPPH清除力、铜离子还原力、铁氰化钾还原力在10月6日采收时最强,总花色苷在10月9日含量最高,羟自由基清除力在10月9日最强.主成分分析结果表明,梅尔诺葡萄的最佳采收期在10月6～9日.