ScINO1基因克隆及酵母多基因多拷贝整合表达载体的构建

利用PCR技术,以酿酒酵母S288c的基因组DNA为模板,扩增酿酒酵母肌醇-1-磷酸合成酶基因(ScINO1)包含1 602 bp的开放读码框,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定,测序结果与GenBank上己登录的ScINO1序列完全一致.对PUG6载体进行改造,构建了rDNA介导的多拷贝整合表达载体pURH,并将ScINO1基因连入载体pURH,获得ScINO1基因超表达载体pURIH.为下一步的微生物发酵法产肌醇和获得能够耐高乙醇的酵母工程菌株的研究奠定基础.
[目的]研究新疆4大酿酒葡萄产区土壤中的微生物群落结构及多样性,为构建新疆酿酒葡萄主产区的微生物菌库奠定基础.[方法]分别从新疆酿酒葡萄主产区采集土壤样品,提取总DNA,通过Illumina MiSeq高通量测序结合生物信息学分析,得到新疆酿酒葡萄主产区的土壤微生物群落结构及多样性.[结果]在12份土壤样品中,伊犁河谷土壤中细菌的群落多样性最高,天山北麓土壤中细菌群落多样性最低;吐哈盆地中真菌群落多样性最低,焉耆盆地中真菌的群落多样性最高.节杆菌属细菌和耐冷酵母属真菌是吐哈盆地和天山北麓葡萄园土壤中的优势菌属;芽单胞菌属细菌和刚毛四枝孢属真菌是伊犁河谷葡萄园土壤中的优势菌属;节杆菌属细菌和赤霉菌属真菌是焉耆盆地葡萄园土壤中的优势菌属.土壤pH值对细菌群落组成的影响最显著,Mn元素含量对真菌群落组成的影响最显著.[结论]揭示了新疆酿酒葡萄主产区土壤中细菌和真菌群落组成,新疆酿酒葡萄产区的微生物多样性存在差异.
为了提高输电线路覆冰厚度预测精度，利用灰色关联分析确定覆冰影响因素对输电线路覆冰增长量的影响权重，采用PSO算法对LSSVM的参数优化，建立了考虑灰色关联权重的PSO-LSSVM输电线路覆冰厚度预测模型。采用实际运行线路的覆冰增长数据进行仿真分析，并与其他覆冰预测模型对比，考虑灰色关联权重的 PSO-LSSVM输电线路等值覆冰厚度预测模型的均方根误差、平均相对误差和全局最大误差分别为0.575、3.124%和4.015%，均小于其他三种预测模型，验证了模型的正确性和实用性。
目的:从fao基因转化的E.coli BL21/DE3菌分离纯化重组酿酒酵母长链脂肪酸醇氧化酶,并对其理化性质进行研究.方法:应用硫酸铵分级沉淀、phenyl-sepharose HR 5/5层析等方法分离纯化长链脂肪酸醇氧化酶,应用SDS-PAGE电泳测定其相对分子量,并对其Km、酸碱稳定性及其底物特异性进行分析.结果:应用上述分离方法得到电泳呈单一条带的酶蛋白,相对分子量大约为64 000,得率为17.6%以上;该酶对十二烷醇的Km在2.5和3.0 μmol/L之间,最适pH值为8.5,在pH 7.0环境中,酶活性为pH 8.5时的60%;对十二烷醇催化的相对活性较其它一些长链的二醇和脂肪酸醇为高.结论:从fao基因转化的E.coli BL21/DE3菌分离出重组酿酒酵母长链脂肪酸醇氧化酶,该酶为碱性酶,其最适底物为十二烷醇,但也可氧化一些长链的二醇和脂肪酸醇.
本试验旨在测定胡麻饼(FM)、DDGS、麦麸皮(WB)、白酒糟(DG)、干啤酒糟(DBG)、苹果渣(AP)的瘤胃降解规律以及小肠消化率.试验选用3头体重为650 kg左右、安装有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛,采用尼龙袋法测定其有机物(OM)、粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解率以及粗蛋白(CP)和氨基酸(AA)的小肠消化率.结果表明:不同食品加工副产品常规营养成分存在差异;不同食品加工副产品的瘤胃有效降解率之间差异显著(P＜0.05),高低顺序为OM:WB＞DDGS＞DBG＞AP＞FM＞DG,CP:WB＞DBG＞FM＞AP＞DDGS＞DG,NDF:WB＞FM＞ DDGS＞DBG＞AP＞DG,ADF:DBG＞AP＞FM＞DDGS＞ WB＞DG;测定样品的CP和各种AA成分小肠消化率差异显著(P＜0.05),其中CP和TAA高低顺序为CP:FM ＞DDGS＞WB＞DBG＞DG＞AP,TAA:FM＞DDGS＞DG＞WB＞DBD＞AP.由此可见,不同食品加工副产品的营养成分含量、瘤胃降解特性不同,为小肠提供可消化粗蛋白潜力也不同.
通过碱处理法制备罗望子种仁球蛋白（tamarind seed globulin，TSG）-表没食子儿茶素没食子酸酯（(－)-epigallocatechin-3-gallate，EGCG）共价化合物，采用紫外-可见光谱分析TSG-EGCG共价复合物结合率并优化结合条件。采用色差计、质构分析仪和扫描电子显微镜研究TSG-EGCG共价复合物添加量对乳化香肠蒸煮损失、保水性和质构的影响。结果表明：当TSG与EGCG质量比1∶0.1、反应pH 9.5、反应温度30 ℃时，复合物的结合率达到最大值。与添加TSG的乳化香肠相比，添加TSG-EGCG复合物的乳化香肠微观结构更加紧密，立体凝胶网络更加均匀清晰，同时蒸煮损失率、保水性及质构特性得到明显改善。综上，TSG-EGCG复合物可以改良乳化香肠的感官品质，且当添加量为2%时，乳化香肠的品质得到明显改善。