谷胱甘肽生产菌重组巴斯德毕赤氏酵母的构建

目的:构建一株新型的产谷胱甘肽的重组巴斯德半赤氏酵母,并研究该重组菌合成谷胱甘肽的能力;方法:利用PCR技术克隆来源于酿酒酵母的γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶编码基因GSH1和谷胱甘肽合成酶的基因GSH2,串联插入表达载体pGAPZA,转化Pichia pastoris GS115,在Zeocin平板上挑选阳性转化子,并对阳性转化重组菌进行摇瓶培养筛选.结果:得到一株GSH的产量高达162.2 mg/L重组菌,说明串联表达酿酒酵母GSH1和GSH2基因,重组甲醇酵母生产谷胱甘肽可以达到较高的水平.
为了研究蛋白酶水解啤酒糟蛋白的动力学性质,采用pH-stat法,以蛋白酶对啤酒糟中提取的蛋白进行水解处理.探讨了底物浓度[S]、酶与底物浓度比[E]/[S]和反应时间t对产物水解度DH的影响.建立了[S]及t同DH间的数学模型.通过不同底物浓度加碱量随水解时间的变化速度,测定出蛋白酶水解啤酒糟蛋白的K_m值.
本试验旨在研究不同蛋白质源部分替代鱼粉对褐点石斑鱼幼鱼生长性能、体组成以及血清生化指标的影响.配制5组等氮等能饲料,对照组饲料(D1)含68％的鱼粉,试验组饲料(D2～D5)是在对照组饲料的基础上分别用豆粕替代10％的鱼粉、豆粕替代20％的鱼粉、啤酒酵母替代10％的鱼粉、玉米蛋白粉替代10％的鱼粉.选取体重在15 g左右的褐点石斑鱼幼鱼180尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复12尾.试验期为8周.结果表明:在生长性能方面,与对照组相比,D2、D3组的增重率、摄食率、特定生长率、粗蛋白质表观消化率差异不显著(P＞0.05),而D4、D5组的上述指标均显著降低(P＜0.05).与D2、D3组相比,D4组的特定生长率显著降低(P＜0.05),肝体指数显著升高(P＜0.05)；D5组的摄食率、特定生长率、蛋白质效率和粗蛋白质表观消化率显著降低(P＜0.05),饲料系数、肝体指数显著升高(P＜0.05).在体组成方面,D5组全鱼和肌肉中粗蛋白质含量显著低于对照组和D2、D3组(P＜0.05)；D4组肌肉中粗脂肪含量显著低于对照组和D2组(P＜0.05).在血清生化指标方面,D3组血清总蛋白、球蛋白、葡萄糖含量显著低于对照组(P＜0.05),而白球比显著高于对照组(P＜0.05)；对照组、D4组血清甘油三酯含量显著高于D3、D5组(P＜0.05)；各组间血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性没有显著差异(P＞0.05).由此得出,作为鱼粉的替代品,豆粕比啤酒酵母和玉米蛋白粉能更好地满足褐点石斑鱼幼鱼的营养需求；从主要生长指标不受影响的角度考虑,褐点石斑鱼幼鱼饲料中可以用豆粕替代20％的鱼粉.
利用纤维生物质生产生物燃料是解决当今世界能源和环境问题的重要途径.本研究从腐烂蔗渣、酒曲、酒糟等样品中分离到一批产乙醇菌株,通过高浓度乙醇选择性培养基筛选、TTC法复筛以及发酵乙醇能力分析,筛选得到一株发酵蔗渣糖化液能力较强的菌株.通过对菌落形态观察、电镜图片分析、18S rDNA基因序列分析,确定该菌株属于酿酒酵母属,命名为Saccharomyces cerevisiae Q2-1.优化了S. cerevisiae Q2-1发酵蔗渣糖化液产乙醇条件,当起始pH为 5.5、发酵温度为30 ℃、糖化液中硫酸铵浓度为0.4%时,静置发酵60 h后,发酵率可达89.2 %,蔗渣产乙醇率ω=13.6 %.
[目的]研究从淋浆水中提取SOD酶的工艺条件.[方法]以陕西太白酒厂酿酒后的淋浆水为材料,比较甲苯、异丙醇和乙醇-氯仿3种有机溶剂从淋浆水中提取SOD粗酶液的效果,研究温度和pH对SOD酶活力的影响以及不同异丙醇浓度对SOD提取的影响,采用丙酮2次沉淀对SOD进行分离纯化,并采用H2O2和乙醇-氯仿对样品SOD酶类型进行敏感性鉴定.[结果]试验确定以80％的异丙醇为最佳粗酶液提取条件.丙酮2次沉淀得到纯化的SOD产品,其酶比活为1 026 U/mg,酶回收率达65.2％.该酶经H2O2和乙醇-氯仿敏感性鉴定为Cu·Zn-SOD,对热和酸碱度具有一定稳定性,在50℃以下,酶相对活性保持在91.2％ ～ 100％,pH为3.0～10.0时SOD活性保持在74.1％ ～93.6％.[结论]该提取工艺过程简便,易操作,是较为理想的从淋浆水中提取SOD的工艺.
利用PCR-DGGE技术及QuantityOne软件分析对比了大曲,酒醅不同部位的微生 物群落结构.通过从原始样品中直接提取DNA,并对全长16srDNA及其V3区片断扩增,变性梯度凝胶电泳及软件分析等,发现不同样品之间的微生物群落 存在一定联系及差异性.通过图谱与系统发育树的结合,能给不同样品赋予特定的分子标签.显示DGGE技术能为微生物菌落结构提供直观图谱,是研究自然传统 发酵食品及其它天然微生态样品的先进方法.