Lactoferricin B基因与几种变异克隆的构建及其在酿酒酵母中的表达与鉴定

目的 构建牛乳铁多肽(Lactoferricin B)的真核表达质粒pYES2/Lactoferricin B,实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达,并初步检测其不同变异的体外抗菌活性.方法 通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列,让其互为模板、引物进行PCR扩增,得到Lactoferricin B与3种变异的基因序列.将它们克隆到穿梭质粒pYES2中,构建pYES2/Lactoferricin B 及3种变异基因重组质粒,转化到大肠杆菌Top10中,让其大量增殖.提取重组质粒经纯化后将其转化到S.cerevisiae中,通过营养缺陷型筛选获得重组酵母菌并通过半乳糖诱导使其表达目的蛋白.经离子交换柱纯化收集目的蛋白后,通过体外抑菌实验比较Lactoferricin B及3种变异重组蛋白的抗菌活性.结果 经PCR扩增检验、DNA测序表明成功构建pYES2/Lactoferricin B与3种变异基因重组质粒.提取诱导后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及质谱检测,证实目的蛋白的存在,相对分子质量约为3.4×103.在大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌的抑菌实验中观测到Lactoferricin B和A17-Lactoferricin B产生了抑菌圈.结论 成功构建pYES2/Lactoferricin B及变异基因重组质粒,该重组质粒能在S.cerevisiae中诱导表达目的蛋白,为进一步研究其生物功能及抗菌活性奠定了基础.
旨在通过优化还原型谷胱甘肽的发酵及分离纯化条件,为GSH大规模的工厂化生产提供理论基础.首先通过筛选获得一株GSH高产菌酿酒酵母Y18,其胞内GSH含量为9.05 mg/g干菌体.进一步研究表明,在培养基中添加L-半胱氨酸和缬氨酸,以及发酵过程中补加葡萄糖可使GSH的总产量分别提高62.0％和146.1％.此外,对GSH在水溶液中稳定性的研究发现偏酸性环境(pH4.5)和氮气保护可显著降低GSH的损失率.最终通过对大孔树脂D001×7和Sephadex G-10的分离纯化条件的优化,获得纯度为98.1％的GSH,收率为73.2％.
啤酒成熟的一个重要方面是啤酒风味物质的成熟,双乙酰是主要指标之一.双乙酰含量是成熟期的时间限制因子,双乙酰在啤酒罐装后的回升问题也不容忽视.啤酒酿造中控制双乙酰的一个主要方法是以α-乙酰乳酸脱羧酶来改变代谢支路,将双乙酰的前体物质α-乙酰乳酸直接快速地转化为乙偶姻,从而降低α-乙酰乳酸转变为双乙酰的量,缩短啤酒成熟时间,减少成品啤酒中双乙酰的回升,提高啤酒风味稳定性.本文主要介绍双乙酰的代谢途径、α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒酿造中降低双乙酰的作用机理以及国内外有关α-乙酰乳酸脱羧酶的研究进展情况.
近年来世界葡萄栽培面积和产量基本保持稳定,2016年栽培面积达794万hm2,总产量9228万t.品种是保持葡萄产业可持续发展的基础,2015年全世界种植面积超过10万hm2的品种有13个,其中'巨峰'和'红地球'是面积最大的鲜食品种,主要分布在中国;'汤普森无核'是种植面积最大也是分布最广泛的制干兼鲜食品种,以土耳其面积最大;其他的10个品种均为酿酒品种,其中的'赤霞珠''美乐''霞多丽''西拉''长相思'和'黑比诺'6个品种被世界广泛认可,而'泰姆普罗''艾伦''歌海娜'和'白玉霓'4个品种主要种植在欧洲的西班牙和法国等地.19世纪70年代,嫁接苗的首次使用将整个欧洲葡萄产业从根瘤蚜的灾害中解救出以来.此后,欧美国家持续进行葡萄砧木的研究,并通过砧木的利用来提高葡萄对多种生物和非生物胁迫的抵抗能力.实践证明,砧木的利用扩展了葡萄的栽培范围,降低了种植成本,改善了果实品质,并且减轻了农药和化学试剂对环境的污染.
根据冰面热平衡方程并以大庆红旗泡水库冰面观测的气温、太阳辐射、风速、相对湿度、冰厚数据以及水库附近安达气象站记录的云量、湿度和海平面气压数据,求解了2009/2010年度冬季的冰表面温度,并分析了冰表面温度特征及其同太阳辐射之间的关系、同气温、风速之间的响应关系.在此基础上,就传统考虑的抗冰工程设计所需的设计冰表面温度进行了评估;就日益增加的安全用冰工程设计所需冰表面温度取值也给予定量讨论;对气候变化下的冰内和冰下水体生态适应问题所需的冰面温度日内变化速率和开河期冰凌爆破所需冰表面温度的取值也进行探索.尽管受国际气象资料观测规定的限制,历史资料的应用存在利用接近观测时刻资料的事实,但仍然期望这些分析和讨论能够推动科学地、更广阔地应用冰表面温度.
以糠醛渣与啤酒糟为混合底物，对绿色木霉(CGMCC3.2941)液态发酵产纤维素酶的一些条件进行了考察和优化。结果表明：底物浓度为2%，糠醛渣：啤酒糟质量比9：1，在(29±1)益培养11 d时，绿色木霉(CGMCC3.2941)所产纤维素酶的滤纸酶活为0.189 FPU/mL，内切酶活为0.451 U/mL，外切酶活为0.392 U/mL。与单一底物糠醛渣相比，混合底物的滤纸酶活、内切酶活、外切酶活分别提高了45.0%、3.8%、38.3%。