卷枝毛霉△12-脱饱和酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的高效表达

△12-脱饱和酶是亚油酸合成的关键酶,为提高△12-脱饱和酶的活性,本研究利用RT-PCR对Mucor sp.EIM-10的△12-脱饱和酶cDNA进行克隆,并导入pYES2.0质粒中,构建重组表达载体.运用醋酸锂转化法将重组质粒导入酿酒酵母,成功构建pYMD12酿酒酵母表达系统.为了进一步提高△12-脱饱和酶的表达水平,用GAP启动子替代pYES2.0质粒自带的启动子,成功构建pYGAPMD12重组菌.最终产物经GC-MS检测显示,pYGAPMD12重组菌转化C18∶1的转化率为69.172％,比pYMD12重组菌提高32.771％.本文为进一步提高△12-脱饱和酶的表达水平提供参考依据.
分别采用液体发酵制备地衣芽孢杆菌、酿酒酵母和嗜酸乳杆菌的菌种，将3种微生物按一定比例接种于豆粕进行固态发酵，采用单因素法对固态发酵豆粕的工艺条件进行优化。结果表明，最佳发酵工艺条件为：地衣芽孢杆菌、酿酒酵母和嗜酸乳杆菌的配比为（2：1：1）×109，接种量为10%，含水量为45%，采用好氧48 h、厌氧24 h的固态发酵工艺，发酵产物中总菌数可达2.18×109 cfu/g，乳酸含量达2.51%，多肽含量达19.22%，其中88.94%的多肽分子量小于2300 Da。
采用酿酒酵母的细胞壁包埋水溶性的绿原酸,通过正交试验考察包埋温度、包埋时间、芯材比和加水量因素对绿原酸微胶囊包埋率的影响.结果表明,在包埋温度40℃、包埋时间6h、芯材比3:1(g/g),以6mL蒸馏水为包埋介质的组合条件下,包埋率最大为18.9%.微胶囊红外光谱分析发现绿原酸的特征官能团的振动消失;荧光显微镜观察显示微胶囊呈球形,微胶囊内的绿原酸自发明亮的荧光;高效液相色谱定性分析显示,绿原酸包埋前后保留时间及紫外扫描图谱相一致.研究结果表明绿原酸成功的包埋到酵母细胞壁内,且在包埋过程中没有发生任何化学变化.
研究了普通小球藻在未处理啤酒废水及改良啤酒废水中的生长及积累油脂特性,并优化了改良啤酒废水培养小球藻的营养盐组成.优化得到适于培养小球藻生产微藻生物质和积累油脂的改良啤酒废水培养基组成为:在未经处理的啤酒废水中添加KNO3 0.50 g/L、MgSO4 0.75 g/L、Na2HPO4 0.75 g/L,调整pH至8.0.在此培养基中小球藻细胞质量浓度达0.94 g/L,为对照组的2.69倍；体积油脂产率达11.84 mg/(L·d),为对照组的1.97倍.研究表明,利用改良的啤酒废水培养小球藻可同时实现有机废水的资源化利用与降低微藻培养成本的双重目的,具有潜在的应用前景.
本试验利用法国著名葡萄分类学家皮埃尔·嘎勒的葡萄叶片表现型分类方法,对烟台葡萄产区主载酿酒品种的叶形结构参数进行测量分析和叶片的标准化描述.结果表明,12个品种的9个叶形参数方差分析结果均达到差异显著水平,可作为鉴别葡萄品种的叶片参数指标,但以SS、SI、δ、ε和S等5个参数鉴别效果最为明显.利用该方法建立葡萄品种资源数据库,既有利于品种资源信息收集,实现品种标准化描述,也有利于对生产中容易混淆的品种进行直观准确鉴别.
目的:建立总有机酸鉴定山葡萄酒及山葡萄露酒真伪的分析方法.方法:采用Shimpack VP-ODS色谱柱,以磷酸二氢钾(0.02mol/L,pH =2.9)-甲醇(98∶2,V/V)为流动相,210nm检测波长,测定不同品种(双红、双优、左优红、北冰红、公酿一号)山葡萄原酒有机酸,确定山葡萄酒及露酒必备有机酸的种类和数量,即有机酸特征峰,以此作为山葡萄酒及露酒品质评价和真伪鉴定的依据.通过计算不同品种山葡萄原酒总有机酸(酒石酸、苹果酸、乳酸、琥珀酸之和)平均值及标准偏差,根据“3σ”原理,以X-3S方法分别确定山葡萄酒及山葡萄露酒总有机酸最低限值.结果:干红山葡萄酒的总有机酸最低限值≥5.0g/L,甜红山葡萄酒的总有机酸最低限值≥4.5g/L,山葡萄露酒的总有机酸最低限值≥0.75g/L.结论:为鉴别山葡萄酒及其露酒的品质和真伪提供了方法依据.