酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响

[目的]探讨酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响.[方法]通过尼罗红染色观察酵母中磷脂合成相关基因突变后脂滴的形态;用绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞自噬蛋白Atg8后,采用荧光显微镜和免疫印迹试验检测突变体细胞自噬的发生情况,并使用荧光染料FM4-64检测液泡形态;此外,检测相关突变体对吩嗪-1-羧酸(申嗪霉素)的敏感性.[结果]在营养有限条件下,酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变体中脂滴的大小或数量受到不同程度的影响,但细胞自噬在常规检测条件下正常;其中磷脂酸胞苷转移酶编码基因CDS1突变导致液泡形态异常(碎片化),而其他磷脂合成相关基因突变不影响液泡形态;回补CDS1后,cds1-DAmP突变体中液泡形态恢复正常;此外,cds 1-DAmP突变体对吩嗪-1-羧酸处理更为敏感.[结论]酿酒酵母中脂滴和液泡形态异常不一定影响细胞自噬的正常进行,但可能影响其对外界环境的响应.
为了探究拟南芥和酿酒酵母来源的磷脂:甘油二酯酰基转移酶(PDAT)在油脂积累过程中与底物相互作用的机制,本研究利用蛋白三维结构模拟、分子对接等生物信息学手段对植物、真菌等来源的PDAT进行蛋白进化关系分析以及PDAT与特定底物的分子对接分析.通过模拟PDAT和磷脂分子的空间对接模型,预测出底物和蛋白空间互作的多个关键氨基酸位点.基于多种磷脂分子和拟南芥PDAT(AtPDAT)的分子对接和氨基酸序列比对,AtPDAT氨基酸序列中的W153,E310,D313,V627可能对蛋白质和底物结合发挥重要作用.该结果精确定位AtPDAT及其它来源的PDAT与磷脂底物的结合位点以及催化位点,为下一步AtPDAT蛋白定向改造提供重要的数据支撑.
文章主要归纳了中国白酒香型的确立和复合香型白酒的发展,总结了当前12种香型白酒之间的相互关系,比较分析了8种复合香型白酒的生产工艺、工艺特点、香味成分和风味特征,提出了复合香型白酒未来发展之路.
利用已有一定胞外cAMP生产能力的酿酒酵母基因工程菌株G2,考察影响其生长和发酵生产胞外cAMP的关键工艺参数,进行初步的发酵工艺优化,为下一步的菌种改造和发酵过程优化奠定基础.结果表明,葡萄糖和酵母粉、蛋白胨含量及其配比是本研究考察参数中影响最大的因素,100 g/L葡萄糖和20 g/L酵母粉、40 g/L蛋白胨(简称为2*YP)培养基发酵的最大cAMP浓度可以达到(4 311.2±308.3)μmol/L,为100 g/L葡萄糖和10 g/L酵母粉、20 g/L蛋白胨(简称为1*YP)含量下最大值(1 972.0±122.5)μmol/L的2.186倍;添加前体物腺嘌呤(终质量浓度0.625 g/L)到前述2种培养基中可以进一步提高产量,分别达到(4 678.1±238.6)、(3 387.3±277.8) μmol/L,增幅分别为8.5％和71.8％;添加前体物次黄嘌呤到100 g/L葡萄糖和1*YP培养基中提高产量6.65％.
以黑芝麻黑色素为模板剂和还原剂制备黑色素-纳米硒，对黑色素-纳米硒的制备工艺进行优化，并表征其结构和形貌，之后进一步探讨其缓释特性、体外抗氧化能力，评价其对红细胞和内皮细胞EAhy926氧化损伤的保护作用，通过肺癌细胞A549模型和海虾致死实验探讨其抑癌活性和生物相容性。结果表明黑色素-纳米硒合成的最适条件为：0.3 mg/mL黑色素溶液与0.555 mg/mL二氧化硒溶液体积比为9∶5，反应pH 7，40 ℃避光磁力搅拌（400 r/min）反应5 h。X射线光电子能谱结果表明Se4＋可被全部还原。红外结果表明黑色素结构中羧基及共轭结构可能参与了反应。同步光散射仪表征黑色素-纳米硒粒径约为200 nm，性质稳定，能较好地分布于水分散体系中。黑色素-纳米硒在人工模拟胃液环境中可稳定存在2 h，具有一定的pH值稳定性，在人工模拟肠液环境中可缓慢释放，能实现在肠液中的长效缓释。体外抗氧化结果表明黑色素-纳米硒对2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除率和总还原力显著优于二氧化硒。黑色素-纳米硒能显著抑制H2O2引发的红细胞溶血和内皮细胞EAhy926的氧化损伤。黑色素-纳米硒对肺癌细胞具有一定的抑制活性。海虾致死实验结果表明黑色素-纳米硒（半致死浓度347.393 μg/mL）具有较二氧化硒（半致死浓度19.781 μg/mL）较弱毒性。本研究为黑色素资源的深入研究和黑色素-纳米硒的制备提供了一定的指导作用，也为黑色素-纳米硒用作膳食补硒剂提供了一定的理论基础。
玉米浆是玉米淀粉加工过程中生成的一种重要的工业副产品.本研究对玉米浆液贮运过程中常见的杂菌污染情况进行了分离、鉴定和分析研究；结果表明,玉米浆液贮运过程中的主要杂菌以芽孢杆菌和酵母菌为主,其中芽孢杆菌有7种,分别是凝结芽孢杆菌(Bxillus coagulans)、栗褐芽胞杆菌(Bacillus badius)、球形芽孢杆菌(Lysinibacillus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)和Rummeliibacillus stabekisii(一种芽孢菌)；酵母菌有2种,它们是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和鲁 氏酵母(Saccharomyces rouxii)等.