酿酒活性干酵母生产工艺优化及干燥剂的选择

对酿酒活性干酵母(AADY)生产工艺进行优化及选定生产用保护剂.酿酒酵母体积分数1%～3%的接种量接于发酵罐,28℃、200r/min,通气量10NL/min,培养40h:流化床干燥器进风温度90℃;司班-60 2%+吐温-80 2%的组合作为生产用保护剂,AADY活菌率可高达77.89%;海藻糖5%+司班-60 2%+吐温-80 2%的组合作为高端生产用保护剂或者用于保藏重要菌种,AADY活菌率可达(83.52±1.87)%.
目的：利用甜叶菊糖基转移酶UGT76G1特异性催化甜菊糖中含量高并且具有较强后苦味的甜菊甙生成高甜度的莱鲍迪甙A。方法：将合成UGT76G1编码基因插入pYES2载体的EcoRI和XhoI酶切位点之间，成功构建了pYES2-UGT重组质粒。重组质粒导入表达宿主酿酒酵母YPH499，利用2％半乳糖对重组菌进行诱导表达。结果：确定了最佳诱导时机为菌体培养后48h，诱导表达时间为12h。并对重组酶粗酶液性质进行了初步研究，确定其最适反应pH为8．0，最适反应温度为40℃，最佳反应时间36h。结论：为建立经济高效的生物催化法对甜菊糖口味改质奠定了基础。
为研究两种酵母在混合培养条件下各菌株生长相互影响的因素,以纯培养为对照,研究两种酵母菌酿酒酵母(简称Sc)和东方伊萨酵母(简称Io)氨基酸代谢的差异,探讨差异氨基酸对Sc生长的影响.结果表明,Io与Sc混合培养体系与Io纯培养体系氨基酸代谢情况相似度较高,且多数氨基酸(包括天冬氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸)含量较Sc纯培养时高,而Sc代谢精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、苏氨酸的速率较Io纯培养体系及混合体系时慢,且Io纯培养通过代谢生成的组氨酸、酪氨酸较Sc纯培养多,最高分别比Sc高出1.86,3.17倍.缺少精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸和苏氨酸及添加组氨酸会对Sc的生长产生显著抑制,表明混合体系中Sc生长受到抑制的原因一方面是因为Io代谢精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸和苏氨酸的速率较Sc快,导致混合体系中Sc对这几种氨基酸的吸收不足,从而导致生长受到抑制,另一方面是Io生成的组氨酸对Sc生长产生抑制.
利用重叠延伸PCR获得酿酒酵母基因沉默组件SADH2,经酶切与酿酒酵母穿梭质粒pYES2.0连接,构建酿酒酵母ADH2基因沉默表达载体。经酶切及测序鉴定成功构建了ADH2基因沉默表达载体pSADH2。
根据当地的气候条件和葡萄栽培历史,并对比法国葡萄酒产区波尔多地区和我国河北省怀来酿酒葡萄产区的气候条件,探讨了吉林省松原市宁江区开发、引种法国酿酒葡萄品种的可行性。
选出最佳的菌种组合黑曲霉、酿酒酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳酸杆菌后,调整混合菌种比例为2∶2∶1∶1,菌株进行固态发酵高温豆粕的最佳工艺条件:接种量10％,料水比1∶3,发酵时间96 h,发酵温度33℃,pH7.0,MgSO4·7H2O 0.04 g,CaCl2 0.02 g,KH2PO4 0.04 g.粗蛋白含量为54.22％,比原料豆粕中的增加了24.36％.抗原蛋白7S球蛋白亚基和11S酸性亚基大部分被混合菌株分泌的酶系降解为分子质量更小的蛋白亚基;氨基酸含量由发酵前的41.53％提高到的48.18％;胰蛋白酶抑制剂(TI)含量由发酵前的16.91 mg/g降到0.20 mg/g,粗蛋白和氨基酸含量大幅度提高,抗原蛋白大部分被降解,TI含量显著降低,营养价值得到了很大改善,且发酵产物有豆香味、黄褐色.