纤维素结合域的酿酒酵母表面展示及其黏附位点初探

利用酿酒酵母表面展示系统表达产琥珀酸丝状杆菌S85纤维素结合域家族2(CBD2),分析其纤维黏附位点.将CBD2基因插入质粒pYDI的AGOg2 3'端,构建pMCBD2重组质粒,化学转化pMCBD2至酿酒酵母EBY100中,2%半乳糖诱导CBD2表达于酿酒酵母表面.利用免疫组化技术检测重组酵母细胞在稻草茎细胞壁上的黏附位点.结果表明:利用酿酒酵母表面展示系统可成功表达产琥珀酸丝状杆菌S85的CBD2基因;重组CBD2的pMCBD2-EBY100与稻草茎孵育后,经抗V5异硫氰酸荧光素标记抗体处理可在稻草茎的薄壁、厚壁和维管组织均检测到荧光.产琥珀酸丝状杆菌S85的CBD2黏附稻草多个组织.结果提示:酿酒酵母表面展示技术与免疫组化技术联用研究瘤胃细菌CBD的黏附位点是可行的.
采用核融合缺陷原生质体融合技术,将嗜杀质粒供体菌5045(α,his4,kar1-1 rho+)中的嗜杀质粒转移到受体菌苹果酒酵母AW中去.用35% PEG,30℃诱导融合20min,经嗜杀活性检出、小型酿造实验、遗传稳定性实验、细胞大小及体积的测定、dsRNA质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳等实验,筛选出4株遗传性状稳定、具有嗜杀活性且发酵性能良好的融合子F12、F30、F57、F65.
一种老酒糟产白酒的生产方法，包括：配方及工艺。其特征是：组成成分为：即墨传统老酒酒糟、稻糠、麦饭石水、酵母、麦曲。老酒糟中还含有老酒发酵所产生的多种氨基酸、维生素和许多香味物质，同时酒糟中也含有质量分数为10%左右的酒精，50%的淀粉，0.8%的还原糖，15%的蛋白质和0.6%的总酸。因此，利用老酒糟生产白酒可以充分利用剩余资源，降低生产成本，提高企业的经济效益。
从黑曲霉eDNA文库中筛选出糖化酶基因，并在酿酒酵母中进行表达．阳性克隆在发酵培养基中培养60h后，产生的糖化酶酶活力达到峰值为4．3U／mL．测定结果显示其糖化酶大小为1908bp，编码636个氨基酸残基组成的蛋白质．酶学性质分析显示该酶的最适反应温度为50℃，pH为5．0．经柱分离纯化其发酵上清液后，SDS-PAGE电泳方法，测得它的分子量大约为70kD，且条带清晰．
本研究通过化学分析和消化代谢试验,评定仔猪对酵母水解物的消化能、粗蛋白质和氨基酸等的生物利用率.在发酵温度34 ℃、pH 6.4条件下发酵24 h获得纯培养液体酿酒酵母乳,再在温度95 ℃热击45 s,控制温度60 ℃、添加5‰的柠檬酸条件下,进行24 h自溶,然后加入2‰木瓜蛋白酶、2‰碱性蛋白酶、2‰甘露聚糖酶、2‰ β－葡聚糖酶、2‰中性蛋白酶等酶解作用16 h后浓缩喷雾干燥获得酵母水解物.试验选用12头体重(20.50±0.98) kg的"杜×长×大"三元杂交猪进行体内消化代谢试验,随机分为2组,每组6个重复,每个重复1头猪.2组试验动物分别饲喂纯合饲粮和以酵母水解物为唯一蛋白质来源的半纯合饲粮.预试期3 d,正试期4 d.结果表明:酵母水解物的总能为19.17 MJ／kg,粗蛋白质含量为54.30%,总氨基酸含量为43.37%.酵母水解物在仔猪上的表观消化能为14.98 MJ／kg,表观代谢能为14.58 MJ／kg;氮表观消化率为 89.38%,氮真消化率达到 93.01%;氮表观利用率为 51.16%,氮真利用率则为70.21%.酵母水解物的组氨酸回肠真消化率为78.68%,其他必需氨基酸的回肠真消化率都高于90.00%;非必需氨基酸中回肠表观消化率和真消化率最高的均为丙氨酸,分别为95.10%、97.29%.有此可见,该工艺条件下制备的酵母水解物为易于被仔猪消化利用的高蛋白质饲料原料.
以羟自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性为考察指标,考察α、β、γ-环糊精及2-甲基、2,6-二甲基、2,3,6-三甲基及羟丙基等β-环糊精的衍生物与啤酒花中重要树脂成分的氢化衍生物六氢β-酸所形成的环糊精包合物的抗氧化活性.结果表明:上述六氢β-酸环糊精包合物均具有不同程度清除·OH和DPPH自由基的活性,且清除活性均好于同浓度下未包合的六氢β-酸.在此基础上,以协同系数为指标,苯甲酸钠为对照,研究六氢β-酸-2-甲基-β-环糊精、六氢β-酸-γ-环糊精、六氢β-酸-羟丙基-β-环糊精、六氢β-酸-2,3,6-三甲基-β-环糊精包合物与食品添加剂VC、NaCl、柠檬酸、蔗糖在·OH和DPPH自由基体系的协同抗氧化作用.结果表明:·OH体系中,各种包合物/柠檬酸的双组分体系和包合物/VC-NaCl-蔗糖的多组分体系均无协同抗氧化性;而包合物/VC、包合物/NaCl、包合物/蔗糖的双组分体系有较好的协同抗氧化性.DPPH自由基体系中,除包合物/蔗糖的双组分体系外,其他双组分和多组分体系均具有较好的协同抗氧化作用.而对照品苯甲酸钠与4 种食品添加剂所形成的双组分体系中均无协同抗氧化作用.