酿酒酵母进级进化过程中的基因丢失现象初探

酿酒酵母进级进化过程中的基因丢失问题很少被研究.利用现有的蛋白质数据库,通过设定判断标准,预期可以获得更多这方面的案例以便进行相关问题的研究.利用SMART蛋白质域家族数据库,根据在已完成测序的7种真核生物蛋白质域家族成员中存在或不存在酿酒酵母蛋白质域信号,判断是否发生了基因丢失.通过这种方法,共有6个酿酒酵母基因判断为在进级进化过程中发生了丢失,还探讨了这些基因发生丢失的可能机制.
通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)扩增黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因和酿酒酵母α-信号肽序列,定向重组到整合型表达载体pδRCMB中,并在CICC1346中实现分泌表达;然后通过同源建模、利用分子模拟软件Discovery Studio 4.1分析其蛋白结构,以对硝基苯-α-D-葡萄糖吡喃苷(pNPG)为底物,建立并确定酶活反应条件,并进行纯化、酶学性质分析;将密码子优化后序列在CICC1346中实现分泌表达,利用淀粉进行共发酵实验.结果显示:重组酶突变后相对野生型蛋白结构无影响.SDS-PAGE分析重组重组酶大小约为70 kDa;优化后最高酶活达到0.69 U/mL,重组酶最适pH为6.5,在pH4.5.0 ～ 7.0维持90％以上的酶活;最适温度为40℃,在30 ～ 40℃维持接近100％的酶活;受Cu2+和MR2+严格抑制;寡聚-1,6-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶及糖化酶协同利用淀粉产乙醇,提高淀粉水解效率.这是首次报道黄曲霉的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母整合型分泌表达.
在100L规模上,通过五因素五水平二次旋转正交组合实验设计,探讨了膨化大米辅料酿造啤酒的外加酶糖化工艺参数对麦汁还原糖含量的影响规律,得出最佳的糖化工艺参数.
头孢菌素C(CPC)酰化酶可用于一步酶法合成7-氨基头孢烷酸(7-ACA).对来自Pseudomonas sp.Strain SE83的高活性CPC酰化酶突变基因进行基于毕赤酵母偏好密码子优化,获得基因SECA.选取毕赤酵母内源信号肽DSE4,构建表达菌G/DSECA,首次在毕赤酵母中分泌了CPC酰化酶.与酿酒酵母α-交配因子前导肽(α-factor)相比,DSE4介导SECA的分泌表达效果更优,其介导SECA表达的胞内、外单位体积酶活分别比α-factor高65％和44％.分别以DSE4和α-factor为信号肽构建β-半乳糖苷酶表达菌G/DSEL与G/MFL,进一步考察DSE4介导异源蛋白的分泌效果,G/DSEL的胞内外单位体积酶活也均高于G/MFL.
工程项目冲突亟需得到工程业界与学术界的重视,由唐冰松撰写并出版的《工程项目冲突管理》一书正是在这一时代背景下面世的.全书以业主方、监理方和承包方为切入点,以项目全寿命周期为视角,通过列举冲突代表性事例的形式研究了各方冲突的来源、分类及管理策略,内容丰富全面.该书的出版可以为工程业界提供有价值的冲突管理策略,为学界建立一个基本的冲突管理研究框架.
为研究酵母菌混合培养条件下生长状态的变化规律以及相互影响的因素,选取2种酵母菌,酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,Sc) 131和毕赤酵母菌(Pichia fabianii,P.f) 65,考察了初始糖含量、pH值、乙醇体积分数对两菌种混合培养时生长状态的影响,并通过气相色谱-质谱分析方法考察了2种细胞脂肪酸组成的差异性.结果表明,相对于纯培养,混合培养条件下,Pf对Sc产生明显的抑制作用,在低糖和低pH值环境条件下,Sc受抑制作用加剧,当初始糖含量2％时,PflSc(菌体浓度比)为28,pH 3.5时,PflSc达37;在外源添加乙醇时,随着乙醇体积分数的升高,Pf受抑制程度较Sc严重,Sc生长处于相对优势地位,说明Sc较Pf耐乙醇,当乙醇体积分数为12％时,PflSc为0.5.经细胞脂肪酸组成分析,Sc主要为C16的棕榈酸和棕榈油酸,Pf主要为C18的油酸、亚油酸和亚麻酸,混合培养时细胞脂肪酸组成主要为C18型脂肪酸,Pf细胞代谢产生的亚油酸和亚麻酸的积累释放可能是抑制Sc生长的因素之一.实验结果可为进一步从转录组水平研究混合酵母相互影响的机制,以及发酵质量控制提供理论支持.