优选非酿酒酵母与酿酒酵母在模拟葡萄汁发酵中生长动力学及酯酶活性分析

目的:探究非酿酒酵母与酿酒酵母混合发酵过程中酵母的生长状况及酯酶活性的变化规律.方法:通过测定川南白酒窖池中分离的非酿酒酵母在液体发酵培养基中的酯酶活性,从中优选1株高产酯酶的酵母,经26S rDNA D1/D2区域序列分析鉴定种属.随后利用模拟葡萄汁进行优选酵母和酿酒酵母的混合发酵,设立同时接种、提前48 h接种和提前96 h接种优选酵母3个实验处理,以两株酵母的纯发酵为对照,研究发酵过程中的酵母生长动力学及不同碳链长度底物(C2～C8)对应的酯酶活性变化.结果:优选的非酿酒酵母为发酵毕赤酵母.酵母生长动力学研究发现,单一酿酒酵母的发酵速率最快,但混合发酵中的酵母数量更多,尤其是提前96 h接种.模拟发酵处理中,同时接种处理的酯酶活性累积量最大(574 mU/mL),酯酶活性在C2～C8有底物特异性,其中C8酯酶活性累积量最高(178～227 mU/mL),C2酯酶活性累积量最低(46～66 mU/mL).结合发酵动力学与发酵中酯酶活性变化,发现酯酶活性与酵母的生长状况有关,当酵母生长达到稳定期,酯酶活性达到最大值.结论:优选酵母与酿酒酵母的同时接种发酵具有较高的C4～C8酯酶活性累积量,有增香酿造的应用潜力.
[目的]研究无花果酒的发酵工艺及其抗氧化活性.[方法]通过单因素试验和响应面分析法优化发酵工艺条件,并检测无花果酒对DPPH 自由基和羟自由基的清除率.[结果]无花果酒的最佳发酵工艺条件为:酿酒干酵母接种量0.03%、SO2 添加量 85 mg·kg-1 、发酵温度28 ℃、发酵天数8 d,此条件下无花果酒的酒精度为 12.2 %vol;与发酵前相比,无花果酒的体外抗氧化活性显著增强,维生素 C、多酚、黄酮含量比分别比发酵前分提高了 4 倍、1.2 7 倍、1.64 倍.[结论]无花果酒具有良好的抗氧化活性,可以作为一种抗氧化剂和自由基清除剂.
采用WL营养培养基对自然发酵前、中、后期出现的酵母菌进行了初步的分类鉴定.产膜的假丝酵母、葡萄汁有孢汉逊酵母及酿酒酵母在自然发酵初期占据主导地位,主要来自葡萄浆果表面;发酵中期主要为毕赤氏酵母;后期则全部为酵母属的酿酒酵母.WL营养培养基对于监测葡萄酒发酵过程中酵母菌群的变化十分有力,可以作为葡萄酒相关酵母鉴定的辅助手段.
南极冰鱼在南极海洋生态系统物质与能量循环中起着至关重要的作用.作为“白血鱼”,其科学研究意义和商业价值也为全球所关注,但其年龄与生长研究仍存在较多的不确定性.为此,本文综述了国内外近50年来南极冰鱼年龄与生长的研究进展,概述了南极冰鱼基本分类及其在南极海域的地理分布.在总结南极冰鱼年龄与生长研究的基本方法(包括渔获物体长频度法及钙化组织分析法等)的基础上,着重对南极冰鱼耳石处理及研究进行了归纳,通过耳石前处理(直接观察、燃烧和切割打磨)和轮纹鉴定等,对耳石研究中的耳石鉴龄方法、耳石形态学及耳石日轮等做了总结.通过总结南极冰鱼年龄与生长研究方面的困难和不足,如幼鱼耳石的处理方式及首轮形成的时间等,对今后中国开展南极冰鱼年龄与生长研究提出了展望.
为了解析菠菜乙醇酸氧化酶(SpGLO)的酶学特性及同工酶谱.首先提取菠菜的RNA并反转录成cDNA,通过NCBI数据库中提供的菠菜GLO基因mRNA序列信息,设计特异性引物,扩增目标序列并连接到pMD19-T载体上进行测序鉴定;随后再次设计引物并在上游引物加入His标签,克隆SpGLO基因构建到pYES2载体上,将该载体转入酿酒酵母中进行表达并通过His-tag亲和柱纯化,然后在不同诱导时间点取样测定SpGLO酶活.结果显示,转化后的酿酒酵母菌株在诱导发酵20 h后能得到最高的GLO活性.以乙醇酸为底物测定SpGLO在不同pH、不同温度条件下的催化活性,其最适pH值为8.0,最适温度为39℃.然后分别以乙醇酸、乙醛酸、甘油酸为反应底物,系统分析了SpGLO的酶学特性,数据显示,SpGLO对乙醇酸的亲和力最高,其Km为0.41 mmol/L,Vm为45.92μmol/(min·mg).以乙醇酸、乙醛酸为底物,使用草酸抑制其催化活性,其Ki分别为4.61,2.09 mmol/L,表明以乙醛酸为底物时SpGLO的催化活性更易被草酸抑制.同时将纯化后的SpGLO通过Caps-氨水电泳体系进行同工酶电泳,经过染色后出现2条同工酶带,表明菠菜叶片中可能存在2种GLO同工酶.为将来深入研究植物GLO同工酶之间的生化特性差异并分析其不同生理功能奠定良好的基础.
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae FFL01)培养条件进行了优化,以提高酿酒酵母中β-葡聚糖含量,根据单因素实验确定影响酵母生物量及β-葡聚糖含量的主要培养条件,由四因素四水平正交实验得出最佳培养条件为pH5、接种量6 mL、温度32℃、装液量40 mL,在此条件下β-葡聚糖最大值为1.403 mg/mL,由方差分析可知,装液量对β-葡聚糖含量影响达极显著水平(P＜0.01),影响主次顺序为装液量＞起始pH＞温度＞接种量.