应用康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系评定东北农区奶牛饲料营养价值

为了给康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)在东北农区奶牛业的应用提供基础理论数据,应用CNCPS体系提出的蛋白质与碳水化合物分类方法,对东北农区27种典型奶牛饲料进行粗蛋白质(CP)、非蛋白氮(NPN)、可溶性蛋白质(SCP)、酸性洗涤不溶蛋白质(ADIP)、中性洗涤不溶蛋白质(NDIP)及酸性洗涤纤维(ADF)、中性洗涤纤维(NDF)、木质素(ADL)和淀粉(Starch)进行了测定,并通过CNCPS提出的计算方法计算了饲料粗蛋白质中的非蛋白氮(PA)、快速降解蛋白质(PB1)、结合蛋白质(PC)、中度降解蛋白质(PB2)、慢速降解蛋白质(PB3)和碳水化合物中的不可利用纤维(CC)、可利用纤维(CB2)、淀粉、果胶(CB1)和糖类(CA).结果表明:SCP/CP的比例以大庆地区全株玉米青贮饲料最高(68.74%),沈阳湿啤酒糟最低(4.12%);ADL/NDF比例则以鞍山苹果渣最高(34.51%),沈阳大麦为最低(2.46%).蛋白质中真蛋白质的含量以沈阳地区豆粕为最高(97.07%),以大庆地区全株玉米青贮最低(26.81%);碳水化合物中不可利用纤维(CC/CHO)比例则以鞍山苹果渣最高(65.01%),齐齐哈尔玉米为最低(1.60%).由结果可知,CNCPS体系分析方法测定指标较多,能够全面反映了饲料的营养成分及在奶牛体内的消化吸收,建议今后可作为东北农区评定奶牛饲料营养价值的方法.
目的 利用毕赤酵母高效表达人组织因子途径抑制因子(TFPI).方法 利用基因定点突变技术对人TFPI cDNA特定序列进行定点突变(同义突变).将获得的突变体及野生型cDNA分别插入表达载体pPic9中,转化酵母宿主菌GS115和KM71,用0.5%的甲醇诱导重组蛋白表达.细胞培养上清经超滤浓缩后,依次用DEAE-sepharose Fast Flow、Heparin-sepharose CL6B及 Sephadex G-75柱层析分离纯化得到重组蛋白,分别采用凝胶扫描成像定量分析和底物显色法测定重组蛋白的表达量和活性.结果 凝胶扫描成像定量分析显示,同义突变体的表达量(1 mg/L)显著高于天然型(0.1 mg/L).活性测定表明GS115重组菌在诱导表达12 h后即可于培养上清中检测到TFPI活性,36 h达峰值;而KM71重组菌诱导表达24 h后才开始于培养上清中检测到TFPI活性,72 h达峰值.两个菌株中突变体mTFPI-pPic9转化子的表达量均显著高于TFPI-pPic9转化子.重组蛋白相对分子质量约为42 000.结论 对TFPI-cDNA特定序列进行同义突变后能显著提高重组蛋白在毕赤酵母细胞中的表达,且显著高于在酿酒酵母和昆虫细胞的表达;重组蛋白具有良好的生物活性.因此,利用毕赤酵母表达TFPI是一种较好的选择.
提取酿酒酵母中S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)的传统工艺多采用高浓度高氯酸或有机溶剂作为提取剂,本研究以较低浓度盐酸为提取液并辅以超声波破碎细胞壁,可降低有机溶剂用量和操作危险性.首先以酿酒酵母干菌体为原料提取胞内SAM,比较高氯酸、乙酸乙酯-硫酸及不同浓度盐酸的提取效果,筛选出最适的提取液,然后通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面试验确定超声辅助提取SAM的最佳工艺.结果表明:选取0.01 mol/L盐酸为提取液;各因素对SAM提取量的影响顺序为料液比>超声功率>超声时间>时间间隔;最优工艺条件为超声功率314 W、超声时间4.1 min、料液比1:27(g/mL),此时SAM提取量为66.56 mg/g,与预测值相差0.98％,SAM提取率可达92.1％.因此,该优化工艺具有实际应用价值.
本实用新型涉及白酒生产装置，尤其涉及白酒发酵装置，包括罐体，罐体内设有隔板，隔板将罐体分为发酵室和吸收室，吸收室和发酵室的侧壁之间转动连接，隔板与罐体连接的部位设有压力阀，隔板上与罐体连接的部位设有凹槽，凹槽的槽口朝向吸收室，凹槽中盛放有生石灰粉末，隔板上连接有两个竖板，两个竖板位于吸收室内，隔板上设有通孔，通孔位于两个竖板之间，通孔位于吸收室一端连接有气球，吸收室中还设有软膜，软膜四周与吸收室的侧壁之间连接有竖杆，软膜位于气球上方，吸收室上还设有注水口，软膜上盛放有水。本装置利用Ca(OH)2与CO2气体化学反应的原理，有效的去除了CO2气体，生成的CaCO3固体还可以做密封材料，增加了装置的密封性。
提取酿酒酵母总RNA进行RT-PCR反转录,根据HAL1基因(GeneID:856113)序列设计阅读框引物,对反转录产物进行PCR扩增,并进行全序列测定,构建筛选标记为带内含子的Km抗性基因的植物双元表达载体,经根癌农杆菌介导法将HAL1基因导入烟草品种龙江911和K326中,进行卡那霉素抗性筛选、GUS染色、目的基因扩增和HAL1基因mRNA荧光定量PCR检测,并对T1代各转化烟草材料烟叶含钾量进行化验分析.测序结果证实PCR扩增得到的DNA与酿酒酵母HAL1基因序列相同,获得抗卡那霉素、GUS阳性的转化植株12株.经PCR扩增检测证实HAL1基因已整合入转基因烟草的基因组,荧光定量PCR分析结果表明HAL1基因已在烟苗根系表达,烟叶含钾量化验结果证明HAL1基因可使烟叶含钾量提高30%.
主要研究了在不同初始发酵糖度和SO2添加量的条件下,冰酒发酵过程中挥发酸变化情况.实验结果表明:葡萄汁初始糖度越高,在整个发酵过程中,其挥发酸也越高；当SO2添加量在30～ 100mg/L之间时,挥发酸含量随着SO2添加量的增加而降低:当SO2添加量为150mg/L时,挥发酸反而比添加30mg/L时有所上升.葡萄汁初始糖度和SO2添加量明显影响冰红酒发酵过程中挥发酸的产生和积累.