酵母乙醇提取物对重组大肠杆菌外源蛋白表达的影响

酵母乙醇提取物是利用啤酒干酵母经培养发酵后提取的富含多种活性物质的混合物.初步实验研究发现,该物质对大肠杆菌蛋白表达有明显促进作用.为了进一步研究其对蛋白表达的作用,以E.coliBL21(DE3)/pGEX-4t-1-ggt为主要研究菌,以2 g.L-1乳糖作为诱导剂,研究酵母乙醇提取物对γ-GGT蛋白表达的作用.研究发现,分批添加终浓度10 g·L-1的酵母提纯提取物到2 g·L-1的乳糖为诱导剂的培养基中可以显著提高γ-GGT蛋白的表达及宿主菌的生长,蛋白表达量比1 mmol·L-1 IPTG诱导效果高10％～50％,菌体密度提高1.75～3倍左右.对于其他的重组蛋白及表达宿主有相似的作用.酵母乙醇提取物与乳糖组成的复合制剂可以有效替代有毒性的IPTG作为诱导剂的使用,为大规模诱导蛋白表达奠定了基础.
"鸡尾酒疗法"特指针对爱滋病的一种治疗方法,是将几种已知的对爱滋病有效的药物组合在一起,联合用药;不同的病人、不同的治疗阶段采用不同的药物组合,从而达到有效抑制爱滋病毒的目的.这种针对不同病人采取的不同的药物组合应基于什么样的原则;治疗应如何开始,何时结束;如何随着病情的发展作出适当的调整;不同药物间的相互作用以及如何避免该疗法的副作用等是目前艾滋病治疗的最前沿的课题 [1].
目的 构建牛乳铁多肽(Lactoferricin B)的真核表达质粒pYES2/Lactoferricin B,实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达,并初步检测其不同变异的体外抗菌活性.方法 通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列,让其互为模板、引物进行PCR扩增,得到Lactoferricin B与3种变异的基因序列.将它们克隆到穿梭质粒pYES2中,构建pYES2/Lactoferricin B 及3种变异基因重组质粒,转化到大肠杆菌Top10中,让其大量增殖.提取重组质粒经纯化后将其转化到S.cerevisiae中,通过营养缺陷型筛选获得重组酵母菌并通过半乳糖诱导使其表达目的蛋白.经离子交换柱纯化收集目的蛋白后,通过体外抑菌实验比较Lactoferricin B及3种变异重组蛋白的抗菌活性.结果 经PCR扩增检验、DNA测序表明成功构建pYES2/Lactoferricin B与3种变异基因重组质粒.提取诱导后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及质谱检测,证实目的蛋白的存在,相对分子质量约为3.4×103.在大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌的抑菌实验中观测到Lactoferricin B和A17-Lactoferricin B产生了抑菌圈.结论 成功构建pYES2/Lactoferricin B及变异基因重组质粒,该重组质粒能在S.cerevisiae中诱导表达目的蛋白,为进一步研究其生物功能及抗菌活性奠定了基础.
白酒工业中使用的酶主要是α-淀粉酶,糖化酶,纤维素酶,蛋白酶,酯化酶等,广泛应用于白酒的制曲,发酵,蒸粮蒸酒,勾兑和丢糟利用等生产环节,对提高出酒率和改善酒的品质及增加浓香型白酒主体香成分发挥了重要作用.白酒的发酵是多种微生物形成的多酶体系,目前对白酒发酵酶和酶系统的深入认识还比较少,对外加酶作用的最适工艺条件和提高酶制剂的协同作用效率仍然方兴未艾,复合酶制剂的应用是发展的主要方向.(孙悟)
利用分子克隆手段构建了酿酒酵母ATP合酶δ亚基和流感病毒血凝素(haemagglutinin, HA)标签融合蛋白的表达质粒.该融合蛋白在酿酒酵母细胞中能够正常表达,而且能够互补编码δ亚基的ATP16基因缺失株在利用非发酵性碳源方面的表型缺陷,表明该融合蛋白具有野生型δ亚基的功能.同时,构建了在大肠杆菌细胞中表达该δ亚基的ScAtp16p-His6融合蛋白,并用纯化的融合蛋白在家兔中制备了其多抗血清.结果表明此多抗可以很好地与ScAtp16p-His6和HA-ScAtp16p两种融合蛋白特异性结合.这些研究材料的获得为深入研究ATP合酶的解偶联机制和磷酸化调控机理奠定了基础.
采用液-液萃取法(liquid-liquid extraction,LLE)提取兼香型白酒和浓香型白酒中的香气化合物,采用闻香分析(GC-O)和GC-MS分离鉴定.兼香型白酒中共鉴定出90种香气化合物,香气贡献较大的化合物是己酸乙酯,4-乙烯基愈疮木酚,己酸,3-甲基丁醇,3-甲基丁酸乙酯,4-乙基愈疮木酚,香草醛,乙酸-2-苯乙酯和丁酸.对比研究浓香型白酒主要香气化合物后认为,酯类是兼香型白酒一类重要的香气化合物,芳香族化合物,酚类化合物以及杂环化合物对兼香型白酒整体香气贡献比浓香型白酒大.