乙醛脱氢酶的克隆表达及其酶学性质

将GeneBank中人源乙醛脱氢酶2的基因序列根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的密码子偏好性进行密码子优化后合成目的基因ALDH2,采用融合PCR技术,构建人源ALDH2基因的表达组件TRP1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-TRP1R.通过电转化的方法将基因表达组件通过同源重组整合到酿酒酵母W303-1A的基因组上,获得基因工程菌W303-ALDH2.工程菌发酵后的粗酶液经His TrapTM excel亲和层析柱纯化获得重组AL-DH2,其活性为20.70 U/mg;重组酶的相对分子质量是56 kDa;最适反应pH和温度分别为5.0和35℃;除Na+外,K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+均能不同程度地提高ALDH2的酶活.以乙醛为底物测得酶的Km值为0.908 mmol/L,最大反应速度Vmax为114.94 U/mg;以辅酶NAD+为底物测得酶的Km值为0.282 mmol/L,最大反应速度Vax为58.82 U/mg.
本实验是以柿子为原料,采用全发酵工艺生产柿子酒,通过一系列单因素试验和正交试验,确定了最佳工艺和影响柿子酒品质的工艺参数.试验结果表明:将酶解后的柿子果浆酸度调至pH 4.0,糖度调至22 °Bx,果浆汁添加10 %(m/v)葡萄酒酵母液,在28 ℃下发酵5 d酿造而成柿子酒.酒体浅黄或金黄,具有鲜柿果香及酒香,无异香,醇涩协调.
用计算代谢通量的方法研究酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)在高盐胁迫条件下的生理代谢. 结果表明, 在盐胁迫条件下, 胞外海藻糖、甘油、乙醇和乳酸的质量浓度分别较常规培养条件下提高了24.44%,60.89%,23.32%和26.76%, 而柠檬酸、 琥珀酸和苹果酸的质量浓度分别较常规培养条件下降低了82.11%,50.37%和53.33%. 代谢通量分析表明, 在盐胁迫培养条件下糖酵解途径各支路的代谢产物通量均有所增加, 而TCA循环中各代谢产物的通量均有所减少.
利用固相微萃取气相串联质谱(SPME-GC-MS/MS)在线酯交换建立了定量分析啤酒原料(麦芽和大米)的亚油酸甘油酯的方法.通过研究不同因素对酯交换及萃取效果的影响,确定在线酯交换固相微萃取的最佳条件:2.0mL样品稀释液添加0.75mL氢氧化钾/甲醇(10.7mmol/L)和1.0g氯化钠,用85 μmPA萃取头在65℃下酯交换和萃取60min.为降低基体效应对定量准确性的影响,以三亚油酸甘油酯为外标分别建立了麦芽和大米的标准曲线.该方法在麦芽和大米中检出限为0.132、0.579μg/g,三亚油酸甘油酯加标回收率为116％和114％.此方法相比于传统方法,所需样品量少、准确性高、操作过程简便,适用于啤酒原料的亚油酸甘油酯的日常高效检测.
酿酒酵母是乙醇发酵工业的生产菌株,增强菌株的耐温性可以减少乙醇生产中降温带来的成本等问题,保证工业发酵能在高温下正常进行.介绍了耐高温酿酒酵母的常用的和新兴的育种技术方法及主要进展,以及在以玉米、甘蔗、木薯及纤维素为原料的乙醇高温发酵生产中的应用,并讨论了耐高温酿酒酵母的选育工作的挑战和乙醇工业应用前景.
建立了测定啤酒和鲱鱼精DNA中的碱基和核苷的阳离子交换色谱法.采用强阳离子交换柱,以水(A)和稀H2SO4(B,pH 2)为流动相,梯度洗脱:0～15 min,0～50% B.6种核苷和碱基(次黄嘌呤、鸟苷、胞苷、胞嘧啶、鸟嘌呤和腺嘌呤)在18 min 内实现基线分离,UV检测波长为254 nm.实验表明,6种核苷和碱基的工作曲线的线性范围为0.1～100 mg/L;检出限为0.009～0.068 mg/L (S/N＝3),峰面积和保留时间的相对标准偏差(RSD)分别为1.3%～2.2% 和1.6%～3.1%.将本方法用于啤酒和鲱鱼精DNA中的碱基和核苷的分析,平均回收率为89.5%～102.9%.