玉米浆液贮运过程中常见杂菌的鉴定与分析

玉米浆是玉米淀粉加工过程中生成的一种重要的工业副产品.本研究对玉米浆液贮运过程中常见的杂菌污染情况进行了分离、鉴定和分析研究；结果表明,玉米浆液贮运过程中的主要杂菌以芽孢杆菌和酵母菌为主,其中芽孢杆菌有7种,分别是凝结芽孢杆菌(Bxillus coagulans)、栗褐芽胞杆菌(Bacillus badius)、球形芽孢杆菌(Lysinibacillus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)和Rummeliibacillus stabekisii(一种芽孢菌)；酵母菌有2种,它们是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和鲁 氏酵母(Saccharomyces rouxii)等.
植物质膜H+-ATPase能把质子泵出根外酸化土壤,增加铁的溶解度,利于植物对铁的吸收.小金海棠是一个苹果铁高效基因型砧木,为研究质膜H+-ATPase在小金海棠铁吸收过程中的功能,本研究通过同源克隆的方法从小金海棠(Malus xiaojinensis)中克隆到了一条全长2865 bp含有完整编码区的质膜H+-ATPase基因(MxHA2),编码954个氨基酸(GenBank登录号:JQ867095).系统进化分析结果表明MxHA2蛋白与碧桃(Prunus persica)的PPA2蛋白亲缘关系较近.基因枪法在洋葱(Allium cepa)表皮内进行亚细胞定位分析,结果表明,MxHA2与GFP的融合蛋白定位于细胞膜上.荧光定量PCR分析表明,缺铁胁迫后,MxHA2基因在根和叶中均有不同程度的增强.把MxHA2基因转化到酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(BJ2168)后,转MxHA2的酿酒酵母H+-ATPase活性极显著增强,且缺铁处理后其生长量持续高于对照,表明该基因编码的蛋白具有H+-ATPase活性,其过量表达能提高酵母菌株的耐缺铁性.结果提示,MxHA2可能在小金海棠的耐缺铁胁迫过程中起重要作用,为进一步研究小金海棠的铁高效机理提供了依据,在果树耐缺铁分子育种上有重要的应用前景.
翻译起始因子eIF1A基因是蛋白合成的重要调控因子之一，在一些植物中可能参与抗逆调控过程。为了研究刚毛柽柳TheIF1A基因是否参与抗逆过程，将TheIF1A基因插入酵母表达载体pYES2中构建成重组载体，转入酿酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）中获得重组型酵母，分别比较转TheIF1A基因酵母和转空载体对照酵母在山梨醇、H2 O2、CdCl2、CuSO4、ZnCl2、KCl、Na2 CO3、MgCl2、-20℃和53℃胁迫处理之后的存活能力。结果显示， TheIF1A基因能有效提高转基因酵母的抗干旱、盐碱、氧化、重金属及极端温度的能力，表明TheIF1A可能参与了柽柳多种抗逆调控过程。
根据裂殖酵母的β-葡萄糖苷酶的基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从裂殖酵母中提取总RNA,然后反转录扩增得到β—葡萄糖苷酶基因（bglA）,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYD1-bglA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,提取酵母菌的DNA通过PCR扩增证实了β-葡萄糖苷酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％ (w/v)的半乳糖诱导48h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于裂殖酵母的β—葡萄糖苷酶展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析研究.
以酿酒酵母为宿主菌株,挖掘可以提高异戊二烯产量的新的基因改造策略.该研究通过敲除线粒体丙酮酸载体(MPC2)、线粒体孔蛋白(POR2)和丙酮酸脱氢酶复合体的E1α亚基(PDA1)基因来增加细胞质乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)的通量,并将含有白杨(Populus alba)异戊二烯合酶基因的质粒pESC-His-ispS分别转入以上3个敲除体,得到工程菌SC1、SC2和SC3.通过摇瓶发酵,SC3效果最优,比原始菌株提高了0.3倍.为了进一步增加Ace-tyl-CoA在胞质中的通量,以△PDA1菌株作为基础,进一步引入并过表达了来自Leuconostoc mesenteroide和Clostrid-ium kluyveri的木酮糖-5-磷酸特异性磷酸转酮酶基因(xylulose-5-phosphate-specific phosphoketolase)(LmPK)和磷酸转乙酰酶基因(phosphotransacetylase)(CkPTA)得到SC4,将质粒pESC-His-ispS转入SC4,得到工程菌pHB1.然后将含有大肠杆菌异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase)(IDI1)的质粒pESC-His-ispS-EcIDI1转入SC4,获得pHB2.摇瓶发酵结果表明,产量达到了54μg/L,比原始菌株提高了约1倍.该研究为后续异戊二烯的研究提供了新的研究思路,也为利用酵母规模化生产异戊二烯的奠定了重要基础.
通过研究陈酿过程中橡木桶陈酿酒所占比例、烘烤程度及陈酿时间三种不同因子对葡萄酒品质的影响,找出其不同水平组合对葡萄酒品质影响的重要性,确定葡萄酒品质最好的水平组合,作为干红葡萄酒的最适陈酿方案.