人生长激素的酵母/哺乳动物穿梭载体的构建

目的酿酒酵母已被证实可作为载体应用于口服基因治疗及免疫中.为研究人生长激素(HGH)以酿酒酵母作为运送载体的口服基因药物,需要构建一种能够在酵母中复制而在哺乳动物细胞表达的HGH穿梭载体.方法利用ECHO克隆系统先构建出HGH的哺乳动物表达载体,使HGH处于CMV启动子的调控下;然后设计引物扩增CMV-HGH片段,连接到酿酒酵母表达载体pESC-URA中,构建HGH的酵母/哺乳动物穿梭载体.结果经EcoRI单酶切、EcoRI/SpeI双酶切、菌落PCR以及序列测定鉴定,确认所构建的确为酵母/哺乳动物穿梭载体pESC-CMV-HGH.结论成功构建的穿梭载体可在酿酒酵母中复制,在哺乳动物中受CMV启动子的调控进行表达,为HGH的口服基因药物研制打下了基础.
酿酒酵母经诱变获得有效利用麦汁糖的优良性能.突变菌株经5d摇床培养使YNB基础培养基的麦芽三糖发酵度从32.4%提高到81.8%.薄层层析证明突变株麦芽三糖转运能力得到改善.模拟工业发酵实验证明突变菌株的麦汁糖发酵性能大大改善,而原有发酵优良性状未受到影响.说明该突变株益于工业啤酒生产和低热啤酒的生产.
利用PCR方法以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae S288c基因组DNA为模板,PCR扩增γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH1)及谷胱甘肽合成酶(GSH2)基因,以乙醇脱氢酶(ADH1)启动子进行表达,并以Kan'基因和Hyg'基因作为筛选标记,构建了两个重组表达质粒YEplace181AK-GSH1和YEplace181AH-GSH2.采用电击法将这两个质粒分别和同时转入工业酿酒酵母菌株Saccharomyces cerevisiae TS013,在含有G418或(和)Hygromycin的平板上筛选阳性克隆S.TS013/GSH1、S.TS013/GSH2和S.TS013/GSH1+GSH2.重组菌进行摇瓶发酵,采用四氧嘧啶法测定培养细胞合成谷胱甘肽含量.结果显示,不同转化子重组菌的胞内谷胱甘肽产量比宿主菌分别提高了44.11％、29.79％和56.47％.
通过收集大量的国内外冰灾、输电线路设计以及研究成果资料,总结了与覆冰相关的主要影响因素,并给出了覆冰参数的换算关系或确定方法以及GPD概率分布模型,最后阐述了国内输电线路工程覆冰参数确定方法现状.
对片冰机蒸发器的传热特点进行了分析，在一定简化基础上，建立了片冰机蒸发器的工程传热模型，得到了制冰时间、制冰厚度、蒸发温度、进水温度、结冰筒材料与壁厚等几个工程应用中的重要参数间的关联式。用该关联式预测的制冰时间与试验结果吻合良好，所建传热模型对片冰机的优化设计有指导意义。
本实用新型涉及白酒技术领域，尤其是一种白酒原料储蓄桶，包括储存桶本体，所述储存桶本体上端一侧通过连接结构转动安装有桶盖，所述连接结构包括上连轴、下连轴和轴承，所述上连轴固定安装于桶盖一侧，所述下连轴固定安装于储存桶本体上端一侧，所述上连轴和所述下连轴通过轴承转动相连，所述桶盖另一侧通过锁扣结构锁定于储存桶本体上端另一侧，所述桶盖下表面与储存桶本体上表面之间固定安装有密封结构，所述密封结构包括凸起、密封垫和凹槽，所述凸起固定安装于桶盖下表面，所述凸起外侧粘贴覆盖设有密封垫，该储存桶密封效果好，值得推广。xa0xa0