木糖异构酶在酿酒酵母表面表达及对木糖代谢影响的初步研究

利用α-型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表面展示系统的载体,将来源于嗜热细菌Thermus thermophilus的木糖异构酶基因xylA,插入到酿酒酵母蔗糖酶信号肽序列与α-凝集素的C端编码序列之间,形成融合表达框,构建重组质粒pSY-xy222,转化酿酒酵母H158.含重组质粒的菌株H158-SXI木糖异构酶活性测定表明,细胞壁上酶活测定值为1.53 U,木糖异构酶在酿酒酵母细胞壁上得到活性表达.木糖葡萄糖共发酵结果显示,重组菌株木糖利用率较出发菌株提高了17.8%.
目的 观察HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒X(HBx)基因沉默对酿酒酵母YKL-40蛋白表达的影响.方法 构建靶向HBx基因的siRNA真核表达载体pRNAT-HBx和阴性对照质粒,同时设空白对照组,采用Lipofectinamine 2000脂质体转染法转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞.采用RT-PCR检测各组中HBx和YKL-40的mRNA水平,Western blot、细胞免疫荧光检测各组中HBx蛋白和YKL-40蛋白的表达.结果 pRNAT-HBx明显抑制HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达,同时YKL-40的mRNA和细胞内蛋白表达水平也随之相应下调.结论 抑制HBx基因的表达能下调HepG2.2.15细胞中YKL-40蛋白的表达,提示HBx蛋白对YKL-40蛋白的表达具有一定的激活作用.
根据凡纳滨对虾抗菌肽 Lvcrustin－B的核酸序列，采用 PAS（PCR－based Accurate Synthesis）的方法合成Lvcrustin－B基因，通过双酶切及T4连接酶技术将Lvcrustin－B插入表达载体pYE－GAPα，获得重组酵母表达载体pYE－GAPα－Lvcrustin－B。 pYE－GAP α－Lvcrustin－B经限制性内切酶AVr II线性化后，通过电穿孔法转化至毕赤酵母细胞GS115，并使用Zeocin进行抗性筛选，从而获得高拷贝转化子，筛选出的酵母菌转化子经扩大培养后使用YPD培养基进行诱导表达。 PCR检测结果表明Lvcrustin－B基因被稳定整合至毕赤酵母染色体。 SDS－PAGE电泳及WB实验显示，目的重组蛋白Lvcrustin－B可在毕赤酵母中表达，分子量大小为19．4 kD，且表达方式为可分泌性表达，重组菌最佳培养温度为30℃。
本发明涉及一种白酒勾调罐，包括：勾调罐本体、缓冲板和搅拌叶片；所述勾调罐本体上端设置有进液口，下端设置有出液口；所述勾调罐本体的下端呈“人”字型；所述出液口设置在“人”字顶端；所述缓冲板上设置有多个出液孔，且设置在出液口处；所述搅拌叶片设置在所述勾调罐本体的中下部，所述搅拌叶片的上端连接转动电机的输出轴，所述电机带动搅拌叶片转动；本发明的白酒勾调罐，由于在出酒口处设置了挡板，引导酒液的流向，破坏了漩涡的形成，加快了酒液的排放速度，省时省力；通过设置搅拌叶片调酒，调酒均匀，调酒效率高。
目的:观察祛风、除湿、温经、活血止痛类中药配伍治疗腰腿痛的临床疗效.方法:治疗组采用腰痛酒(制附子、制川乌、制草乌、桂枝、牛膝、钩藤、玄胡、枸杞、细辛、三七等)治疗本病1500例,并设对照组对照,结果:治疗组优良率为96.8%,对照组优良率为79%.两组比较P＜0.01,治疗组疗效明显优于对照组.提示:本方法对本病具有祛风除湿,温经通络,活血止痛,补益肝肾的功效.
建立使用搅拌棒吸附萃取(SBSE)和热脱附系统(TDs)并结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)测定白酒中酯类成分的分析方法.实验中对影响SBSE的因素(萃取时间、乙醇加入量和氯化钠加入量)及影响TDs的条件(脱附时间、脱附温度和CIS4进样口温度)进行了优化.在所得优化条件下采用外标法对白酒中的乙酯类成分进行定量测定,结果表明,白酒中酯类成分的检出限范围为8.1×10-4～9.3×10-2ng,加标回收率范围为72.4%～98.6%,6次测定的相对标准偏差小于10%.该方法具有很高的灵敏度和很好的重现性,可用于白酒中乙酯类成分的快速分析测定.