TAT-HBsAg融合基因在酿酒酵母中的同源重组与表达

[目的]克隆HBsAg和TAT-HBsAg融合基因,在酿酒酵母中同源重组表达.[方法]以HBV基因组为模板PCR扩增HBsAg和TAT-HBsAg融合基因;从酿酒酵母文库质粒pHSS6-mTn-3xHA/LacZ中筛选出可在酿酒酵母中进行同源重组且具有强启动子的质粒pHL;将质粒pHL与TAT-HBsAg融合基因酶切后连接,转化酵母进行同源重组表达;ELISA鉴定蛋白的表达.[结果]酵母中表达了HBsAg蛋白和TAT-HBsAg融合蛋白.[结论]TAT-HBsAg融合基因可以通过同源重组,在酵母细胞中进行产物表达.
[目的]敲除禾谷镰孢(Fusarium gramiearum)中碳源代谢调控因子FgCreA,并对其营养生长、有性生殖和致病力等方面进行研究,为研究禾谷镰孢中碳源代谢机制提供依据.[方法]根据酵母数据库SGD和NCBI数据库中的序列,利用酿酒酵母中碳源代谢调控因子Migl确定禾谷镰孢中的碳源调控因子FgCreA;在NCBI数据库中检索其他物种中碳源代谢调控蛋白,使用ClustalW2软件进行多重序列比对,并用MEGA5软件构建系统进化树,同时在InterProScan网站上预测其蛋白结构域;在NCBI数据库中检索与禾谷镰孢碳源吸收相关的结构基因和真菌毒素DON生物合成的相关基因,调取起始密码子上游1 000 bp的片段,预测FgCREA基因结合位点位置;用Primer5软件设计引物,利用Split-PCR和PEG介导原生质体转化的方法进行基因敲除,并通过PCR和Southernblot验证获得FgCREA基因敲除突变体Fgcrea.根据突变体Fgcrea营养生长、有性生殖和致病力等方面的变化分析FgCREA的功能.[结果]通过生物信息学方法,明确禾谷镰孢中只有一个碳源代谢调控因子基因FgCREA (FGSG_09715),氨基酸序列416 aa,共包含两个保守的C2H2锌指结构区域.FgCreA同源蛋白在各类真菌中均存在一定程度的同源性,具有较高的保守性.禾谷镰孢碳源吸收相关结构基因(XYL2、ARA1、ICL1、PG1、SUC2)和真菌毒素DON生物合成相关基因(TRI1、TRI3、TRI4、TRI5、RI6、TRI7、TRI8、TRI10、TRI12、TRI101)启动子区均含有FgCREA DNA结合位点.采用Split-PCR技术和PEG介导的原生质体转化,通过PCR和Southern blot获得并验证了两个FgCREA基因敲除突变体.表型观察发现,突变体Fgcrea的生长速度与野生型相比下降90％;分生孢子形态正常,但产孢量与野生型相比降低88％;有性生殖阶段,突变体Fgcrea可以产生正常的子囊壳、子囊和子囊孢子,但需要比野生型长20-28 d;突变体Fgcrea对钠盐较敏感,侵染小麦穗不发病.[结论]获得禾谷镰孢碳代谢调控因子FgCreA敲除突变体,明确FgCreA参与营养生长和有性生殖,并能够影响致病过程.但是否影响相关结构基因的转录水平和DON生物合成仍需进一步验证.
使用福林酚法测定石榴酒的总酚含量,以还原能力、DPPH自由基清除能力、超氧阴离子清除能力及羟基清除能力为抗氧化指标,对石榴酒酿造过程中多酚含量及抗氧化能力进行分析.结果表明,在酿造过程中,石榴酒总酚、DPPH自由基清除能力、超氧阴离子清除能力及羟基清除能力在酿造过程中稍微有所下降,但最终趋于稳定并维持在较高水平,还原能力则始终保持恒定,与原汁相比无明显损失.石榴酒作为一种新型养生果酒,其多酚含量较高,表现出较强的抗氧化能力.同时,本试验中所选的3种酿酒酵母在酿造过程中对石榴酒的抗氧化能力的影响彼此之间无显著差异.
以糯米和桂圆为原料分别预加工成糯米甜酒酿和桂圆果汁,然后将这两种半成品按一定的比例混合进行发酵来生产桂圆糯米滋补酒.研究了不同取汁工艺对桂圆果汁品质及发酵的影响;采用正交试验法确定了混合醪液配比、混合发酵温度、发酵时间等工艺条件,测定了发酵醪中还原糖,酒度及总酸在发酵过程中的变化,并进行了桂圆糯米酒营养成分的分析.
通过单菌种,多菌种的复合固态发酵筛选,建立了一种高效降解金针菇栽培袋料中棉酚的方法:以酿酒酵母(Saccharom yces cerevisiae)单菌种发酵.通过单因素试验初步确定金针菇栽培袋料发酵脱毒的工艺条件,单因素最佳条件为:接种量15％,含水量60％,培养温度40℃.通过响应面法优化脱毒条件,响应面分析结果为三个因素两两之间的交互影响作用并不显著,一个因素对棉酚脱毒率的影响不会随着另一因素的改变而有明显变化,并得出金针菇栽培袋料发酵脱毒的最优条件为接种量14.85％,含水量60.70％,培养温度40.15℃,金针菇栽培袋料中的棉酚从287.563 mg/kg降至33.685 mg/kg,脱毒率达到88.286％.
本发明公开了一种桂圆枸杞白酒的酿造方法，它以桂圆和枸杞两种备受历代医家推崇的保健滋补品结合，采用生物酶解、微生物低温发酵、两次蒸馏酿制而成蒸馏酒，充分提取对人体有益的有效成分，在陶坛或不锈钢罐中陈酿得到桂圆枸杞白酒。该桂圆枸杞白酒香气优雅、浓郁，口感丰满、醇和，具有典型的突出风格，成为酒类饮品中的佳品。