毛冬青三萜C-28位氧化修饰相关CYP450基因的发掘和功能鉴定

药用植物毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样.三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关.本研究通过分析毛冬青转录组数据,筛选到1个可能具有五环三萜C-28位氧化功能的CYP450基因(IpAO2).克隆IpAO2基因并将其通过质粒转化法导入能高效合成amyrin的酿酒酵母工程菌中,GC-MS分析重组酵母代谢产物,发现IpAO2基因编码的蛋白可以将α-amyrin和β-amyrin分别氧化为熊果酸和齐墩果酸,确定IpAO2是一个五环三萜C-28位氧化酶基因.IpAO2基因的鉴定对全面阐明毛冬青三萜及三萜皂苷的生物合成机制具有重要意义,为后期开展毛冬青活性三萜类化合物的代谢工程研究奠定了基础.
预测的概念是随着人类对客观事物的认识的深入而不断发展的.在我们讨论某一现象能否预测时,应该考虑到这种发展变化.当我们把预测的概念理解为一个确定性的概念时,那么对于随机现象的预测是不可能的.一旦我们把预测的概念扩展到概率预测的范畴时,随机现象则被认为是可以预测的.如果把地震预测方法或意见的提出比做"酿酒"的话,那么对地震预测方法或意见的评估可以比做"品酒",而地震预测方法或意见的综合则可比做"勾兑".酿酒是基础,而品酒对酿酒有着重要的指导作用,只有勾兑,才能出好酒.评估和综合相比,首先是评估,在评估的基础上,才能有正确的综合.笔者认为:目前的倾向是重"酿酒",轻"品酒"和"勾兑".即使品酒,也常是由酿酒者自酿自品,这会影响其客观性和科学性.盲目追求高对应率一方面可能会得到一些虚假的预测指标,另一方面还可能会错过一些有意义的预测指标,特别是一些短期的预测指标.
本研究优化了有机溶剂稀释法结合气相色谱-燃烧-同位素质谱仪(GC-C-IRMS)测定白酒中乙醇中碳同位素比值(δ13C)的方法.分析了5种年份原酒、24种市场流通固态法白酒以及14种固液法白酒的δ13C值.结果表明:同系列的年份原浆酒中乙醇δ13C值基本无差异;酒中乙醇δ13C值与酿酒粮食和产地有一定关系;利用δ13C鉴别固液法和固态法白酒具有一定可行性.
本试验以酿酒酵母和枯草芽孢杆菌作为混合菌种发酵小麦麸皮,通过Amberlite XAD-2柱分离纯化制备麦麸阿魏酰低聚糖(feruloyl oligosaccharides,FOs),探讨麦麸FOs对敌草快(diquat)诱导的大鼠氧化应激是否有缓解作用.试验选用体重相近的断奶雄性大鼠48只,随机分为未攻毒组、攻毒组、攻毒+100 mg/kg BW麦麸FOs组、攻毒+200 mg/kg BW麦麸FOs组、攻毒+300 mg/kg BW麦麸FOs组和攻毒+100 mg/kg BW维生素C组,每组8个重复,每个重复1只鼠,各组大鼠均饲喂相同的商业饲料.麦麸FOs和维生素C配制成水溶液,采用灌胃的方式给予,未攻毒组、攻毒组用生理盐水替代,灌胃体积0.2 mL,连续灌胃15 d.灌胃结束当天,未攻毒组大鼠注射0.3 mL生理盐水,其他5组按0.1 mmol/kg BW的剂量腹腔注射0.3 mL敌草快.敌草快攻毒12 h后取样,分析各组大鼠血浆以及肝脏、肾脏和回肠中总抗氧化能力(T-AOC),过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及谷胱甘肽(GSH)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量.结果显示:1)通过混菌发酵小麦麸皮制备麦麸FOs,利用Amberlite XAD-2柱进行分离纯化,获得的麦麸FOs浓度为0.059 mmol/g.2)腹腔注射敌草快显著降低大鼠血浆中SOD活性和GSH含量(P<0.05),显著降低大鼠肝脏中T-AOC,CAT、GSH-Px活性及GSH含量(P<0.05),显著降低大鼠肾脏中T-AOC及CAT、SOD活性(P<0.05),显著降低大鼠回肠中T-AOC,CAT、GSH-Px活性及GSH含量(P<0.05),并显著提高大鼠血浆和各组织中8-OHdG含量(P<0.05).3)在敌草快引起的氧化应激状态下,灌胃一定剂量的麦麸FOs可以显著提高大鼠血浆中SOD(400 mg/kg BW)、GSH-Px活性(100和200 mg/kg BW)以及GSH含量(100和200 mg/kg BW)(P<0.05),显著提高大鼠肝脏中T-AOC(100、200和400 mg/kg BW),CAT(200和400 mg/kg BW)、SOD(100、200和400 mg/kg BW)和GSH-Px活性(100、200和400 mg/kg BW)以及GSH含量(100、200和400 mg/kg BW)(P<0.05),显著提高大鼠肾脏中T-AOC(400 mg/kg BW),CAT(200 mg/kg BW)和GSH-Px活性(200和400 mg/kg BW)以及GSH含量(400 mg/kg BW)(P<0.05),显著提高大鼠回肠中T-AOC(200 mg/kg BW),SOD(400 mg/kg BW)和GSH-Px活性(100、200和400 mg/kg BW)以及GSH含量(100、200和400 mg/kg BW)(P<0.05),显著降低血浆和各组织中8-OHdG含量(血浆、肾脏、回肠:100、200和400 mg/kg BW;肝脏:100 mg/kg BW)(P<0.05);且灌胃200、400 mg/kg BW麦麸FOs后,大鼠血浆和组织中部分抗氧化相关指标可恢复到正常生理状态水平.综上所述,本试验制备的麦麸FOs可以通过有效提高大鼠血浆和组织中抗氧酶活性和GSH含量,降低DNA氧化应激代谢产物8-OHdG的含量,有效缓解由敌草快诱导产生的氧化应激.
以2株乳酵母菌、地方性奶酒酵母泥、乳酸菌、丹宝利活性酿酒干酵母为发酵菌种,研究其在乳清酒发酵中各发酵剂的发酵能力、发酵特性,并对发酵所得乳清酒品质进行了分析,筛选出5#组合菌种为本研究最佳试验用发酵菌种.
在软木塞弊端愈加突显之时,全球掀起了新型葡萄酒瓶塞研发的热潮.这些新型瓶塞以其不同的优点占领一定的国际市场.如:避免TCA污染,易于启塞等.本文综述了7种主要葡萄酒新型瓶塞的基本构造与特点,为我国引进及研发新型瓶塞提供参考.